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【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定乳痛宁糖浆中芍药苷的含量。方法 HPLC法，以C18化学键合硅胶（4.6mm×150mm，5μm）为色谱柱，流动相为甲醇：水（30：70），流速：1.0ml·min-1，柱温：25℃；检测波长为230nm。结果 芍药苷检测浓度在16.68-122.32μg·ml-1范围内与峰面积值呈系良好线性关系，（r=0.998）；平均加样回收率为99.30%，RSD=0.88%（n=9）。结论 本方法简便快捷、灵明度高、重现性好，可以作为该制剂的质量控制之一。
【关键词】 HPLC法；芍药苷；乳痛宁糖浆；含量测定
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.04.017
文章编号：1004-7484（2014）-04-1817-02
【Abstract】Objective To establish a method of determination of paeoniflorin in Rutongning syrup by HPLC.Methods The contents of paeoniflorin in Rutongning syrup were determination by HPLC.Results The calibration curre is linear in the range 16.68-122.32μg/mL（r=0.9998，n=7） for Rutongning syrup.The average recovery was 99.30﹪.RSD=0.88﹪（n=9）.Conclusion The method is sample、quick、accurate and with a reproducibility and can be used for the quality control of the preparation.
【Key words】 Rutongning syrup；paeoniflorin；HPLC；determination
乳痛宁糖浆是新疆医科大学第一附属医院自制制剂，由赤芍（芍药）、柴胡、香附、锁阳、当归、川芎等13味中药制成，具有疏肝益肾、行气活血、消痹止痛的功效，主要用于治疗妇女乳腺小叶增生、乳房肿块及乳房肿痛，我院临床广泛适用，疗效确定。本文采用HPLC法对乳痛宁糖浆中芍药苷进行含量测定，方法简便、快捷、准确、重现性好、干扰少，符合医院制剂的检测要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Peseries200高效液相测谱仪（美国PE公司）；BS-224S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系数有限公司）；UC-1000型超声波清洗机（宁波科生仪器厂）；紫外分光光度仪1700UV岛津（日本岛津公司）。
1.2 试药 芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110796-200423）；甲醇（色谱纯），超纯水；乳痛宁糖浆（新疆医科大学第一附屬医院药学部，批号080303，080324，080325）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：以C18化学键合硅胶（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇-水|（30：70）；流速：1.0ml·min-1；柱温：25℃；检测波长：230nm；进样量：10μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品13.90mg，置于25ml棕色容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，定容。即配成每ml含556.00μg芍药苷对照品浓贮备溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品10ml，置50ml棕色量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，定容，超声处理40min，用0.45μm微孔滤膜器过滤，即得。
2.4 干扰试验 按处方配置却赤芍的乳痛宁糖浆阴性样品，按照“2.3”项下方法制备成阴性对照品溶液，与“2.2”、“2.3”项下溶液分别进样。结果，供试品色谱柱中在与对照品色谱柱相同保留时间处有相同色谱峰；阴性对照品在此无干扰。色谱见图1。
2.5 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液0.75、1.0、2.5、3.0、3.5、5.0、5.5ml分别置于25ml棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜器过滤，分别进样，记录色谱图。以芍药苷的浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=13975X-29298.01（r=0.9998）。结果表明，芍药苷浓度在16.68-122.32μg·ml-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密吸取浓度为180.00μg·ml的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件连续进样共5次。记录峰面积。结果，峰面积的平均值为414797.944，RSD=1.79%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.7 重现性试验 取样品（批号：080325），按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算芍药苷的含量，结果，平均含量为74.01μg·ml-1，RSD=0.84%（n=6）表明该方法重现性良好。
2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液（080325）在室温下放置，过045μg微孔滤膜，分别于0、2、4、6、8、24h测定含量，结果，RSD为1.84%（n=6），表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.9 加样回收率试验 精密吸取已知含量样品（批号：080325）1mL，置10mL棕色容量瓶中，分别精密加入芍药苷对照品（180.00μg·mL-1）1.5，2.0，2.5mL，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件测定峰面积。计算加样回收率，结果见表1。
3 讨 论
3.1 通过紫外检测波长（190-350nm），发现芍药苷对照品溶液在229.5nm处有最大吸收波长，故实验中的检测波长选为230nm。
3.2 采用HPLC法测定芍药苷含量的文献[1-6]曾报道过多种流动相。通过大量的初期试验发现不同配比的流动相出峰时间不同，用甲醇-水（30：70）作为流动相时，出峰时间适宜，峰形也较好，即节省了时间，也节省了流动相的用量，经济适用。
3.3 本文采用HPLC法测定乳痛宁糖浆中芍药苷的含量，回收率和含量测定的结果表明，此方法操作简便，重现性好，准确快速，较符合医院制剂快检的要求。
参考文献
[1] 中国药典[M]（一部） 2005年版.化学工业出版社，2005：109.
[2] 中国药典[M]（一部） 2005年版.化学工业出版社，2005：89.
[3] 中国药典[M]（一部） 2005年版.化学工业出版社，2005：28.
[4] 赵军，张茂慧，李景庄，李献林.乳痛宁颗粒的质量标准研究.中国新药杂志，2006，18：17-19.
[5] 王述蓉，叶利明，陈聪等，HPLC法测定强肝糖浆中芍药苷的含量.药物分析杂志，2006，26（9）：1331-1332.
[6] 郭维儿，倪晟.HPLC法测定复元浓缩片中芍药苷的含量.中成药，2004，26（8）：附18.
【关键词】 HPLC法；芍药苷；乳痛宁糖浆；含量测定
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.04.017
文章编号：1004-7484（2014）-04-1817-02
【Abstract】Objective To establish a method of determination of paeoniflorin in Rutongning syrup by HPLC.Methods The contents of paeoniflorin in Rutongning syrup were determination by HPLC.Results The calibration curre is linear in the range 16.68-122.32μg/mL（r=0.9998，n=7） for Rutongning syrup.The average recovery was 99.30﹪.RSD=0.88﹪（n=9）.Conclusion The method is sample、quick、accurate and with a reproducibility and can be used for the quality control of the preparation.
【Key words】 Rutongning syrup；paeoniflorin；HPLC；determination
乳痛宁糖浆是新疆医科大学第一附属医院自制制剂，由赤芍（芍药）、柴胡、香附、锁阳、当归、川芎等13味中药制成，具有疏肝益肾、行气活血、消痹止痛的功效，主要用于治疗妇女乳腺小叶增生、乳房肿块及乳房肿痛，我院临床广泛适用，疗效确定。本文采用HPLC法对乳痛宁糖浆中芍药苷进行含量测定，方法简便、快捷、准确、重现性好、干扰少，符合医院制剂的检测要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Peseries200高效液相测谱仪（美国PE公司）；BS-224S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系数有限公司）；UC-1000型超声波清洗机（宁波科生仪器厂）；紫外分光光度仪1700UV岛津（日本岛津公司）。
1.2 试药 芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110796-200423）；甲醇（色谱纯），超纯水；乳痛宁糖浆（新疆医科大学第一附屬医院药学部，批号080303，080324，080325）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：以C18化学键合硅胶（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇-水|（30：70）；流速：1.0ml·min-1；柱温：25℃；检测波长：230nm；进样量：10μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品13.90mg，置于25ml棕色容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，定容。即配成每ml含556.00μg芍药苷对照品浓贮备溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品10ml，置50ml棕色量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，定容，超声处理40min，用0.45μm微孔滤膜器过滤，即得。
2.4 干扰试验 按处方配置却赤芍的乳痛宁糖浆阴性样品，按照“2.3”项下方法制备成阴性对照品溶液，与“2.2”、“2.3”项下溶液分别进样。结果，供试品色谱柱中在与对照品色谱柱相同保留时间处有相同色谱峰；阴性对照品在此无干扰。色谱见图1。
2.5 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液0.75、1.0、2.5、3.0、3.5、5.0、5.5ml分别置于25ml棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜器过滤，分别进样，记录色谱图。以芍药苷的浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=13975X-29298.01（r=0.9998）。结果表明，芍药苷浓度在16.68-122.32μg·ml-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密吸取浓度为180.00μg·ml的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件连续进样共5次。记录峰面积。结果，峰面积的平均值为414797.944，RSD=1.79%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.7 重现性试验 取样品（批号：080325），按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算芍药苷的含量，结果，平均含量为74.01μg·ml-1，RSD=0.84%（n=6）表明该方法重现性良好。
2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液（080325）在室温下放置，过045μg微孔滤膜，分别于0、2、4、6、8、24h测定含量，结果，RSD为1.84%（n=6），表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.9 加样回收率试验 精密吸取已知含量样品（批号：080325）1mL，置10mL棕色容量瓶中，分别精密加入芍药苷对照品（180.00μg·mL-1）1.5，2.0，2.5mL，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件测定峰面积。计算加样回收率，结果见表1。
3 讨 论
3.1 通过紫外检测波长（190-350nm），发现芍药苷对照品溶液在229.5nm处有最大吸收波长，故实验中的检测波长选为230nm。
3.2 采用HPLC法测定芍药苷含量的文献[1-6]曾报道过多种流动相。通过大量的初期试验发现不同配比的流动相出峰时间不同，用甲醇-水（30：70）作为流动相时，出峰时间适宜，峰形也较好，即节省了时间，也节省了流动相的用量，经济适用。
3.3 本文采用HPLC法测定乳痛宁糖浆中芍药苷的含量，回收率和含量测定的结果表明，此方法操作简便，重现性好，准确快速，较符合医院制剂快检的要求。
参考文献
[1] 中国药典[M]（一部） 2005年版.化学工业出版社，2005：109.
[2] 中国药典[M]（一部） 2005年版.化学工业出版社，2005：89.
[3] 中国药典[M]（一部） 2005年版.化学工业出版社，2005：28.
[4] 赵军，张茂慧，李景庄，李献林.乳痛宁颗粒的质量标准研究.中国新药杂志，2006，18：17-19.
[5] 王述蓉，叶利明，陈聪等，HPLC法测定强肝糖浆中芍药苷的含量.药物分析杂志，2006，26（9）：1331-1332.
[6] 郭维儿，倪晟.HPLC法测定复元浓缩片中芍药苷的含量.中成药，2004，26（8）：附18.