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【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定乳痛宁糖浆中芍药苷的含量。方法 HPLC法,以C18化学键合硅胶(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇:水(30:70),流速:1.0ml·min-1,柱温:25℃;检测波长为230nm。结果 芍药苷检测浓度在16.68-122.32μg·ml-1范围内与峰面积值呈系良好线性关系,(r=0.998);平均加样回收率为99.30%,RSD=0.88%(n=9)。结论 本方法简便快捷、灵明度高、重现性好,可以作为该制剂的质量控制之一。
【关键词】 HPLC法;芍药苷;乳痛宁糖浆;含量测定
doi:10.3969/j.issn.1004-7484(x).2014.04.017
文章编号:1004-7484(2014)-04-1817-02
【Abstract】Objective To establish a method of determination of paeoniflorin in Rutongning syrup by HPLC.Methods The contents of paeoniflorin in Rutongning syrup were determination by HPLC.Results The calibration curre is linear in the range 16.68-122.32μg/mL(r=0.9998,n=7) for Rutongning syrup.The average recovery was 99.30﹪.RSD=0.88﹪(n=9).Conclusion The method is sample、quick、accurate and with a reproducibility and can be used for the quality control of the preparation.
【Key words】 Rutongning syrup;paeoniflorin;HPLC;determination
乳痛宁糖浆是新疆医科大学第一附属医院自制制剂,由赤芍(芍药)、柴胡、香附、锁阳、当归、川芎等13味中药制成,具有疏肝益肾、行气活血、消痹止痛的功效,主要用于治疗妇女乳腺小叶增生、乳房肿块及乳房肿痛,我院临床广泛适用,疗效确定。本文采用HPLC法对乳痛宁糖浆中芍药苷进行含量测定,方法简便、快捷、准确、重现性好、干扰少,符合医院制剂的检测要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Peseries200高效液相测谱仪(美国PE公司);BS-224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系数有限公司);UC-1000型超声波清洗机(宁波科生仪器厂);紫外分光光度仪1700UV岛津(日本岛津公司)。
1.2 试药 芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号110796-200423);甲醇(色谱纯),超纯水;乳痛宁糖浆(新疆医科大学第一附屬医院药学部,批号080303,080324,080325)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:以C18化学键合硅胶(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水|(30:70);流速:1.0ml·min-1;柱温:25℃;检测波长:230nm;进样量:10μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品13.90mg,置于25ml棕色容量瓶中,加甲醇溶液稀释至刻度,定容。即配成每ml含556.00μg芍药苷对照品浓贮备溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品10ml,置50ml棕色量瓶中,用甲醇溶液稀释至刻度,定容,超声处理40min,用0.45μm微孔滤膜器过滤,即得。
2.4 干扰试验 按处方配置却赤芍的乳痛宁糖浆阴性样品,按照“2.3”项下方法制备成阴性对照品溶液,与“2.2”、“2.3”项下溶液分别进样。结果,供试品色谱柱中在与对照品色谱柱相同保留时间处有相同色谱峰;阴性对照品在此无干扰。色谱见图1。
2.5 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液0.75、1.0、2.5、3.0、3.5、5.0、5.5ml分别置于25ml棕色量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜器过滤,分别进样,记录色谱图。以芍药苷的浓度(X)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=13975X-29298.01(r=0.9998)。结果表明,芍药苷浓度在16.68-122.32μg·ml-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密吸取浓度为180.00μg·ml的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件连续进样共5次。记录峰面积。结果,峰面积的平均值为414797.944,RSD=1.79%(n=5),表明仪器精密度良好。
2.7 重现性试验 取样品(批号:080325),按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定峰面积,计算芍药苷的含量,结果,平均含量为74.01μg·ml-1,RSD=0.84%(n=6)表明该方法重现性良好。
2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(080325)在室温下放置,过045μg微孔滤膜,分别于0、2、4、6、8、24h测定含量,结果,RSD为1.84%(n=6),表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.9 加样回收率试验 精密吸取已知含量样品(批号:080325)1mL,置10mL棕色容量瓶中,分别精密加入芍药苷对照品(180.00μg·mL-1)1.5,2.0,2.5mL,按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.4.1”项下色谱条件测定峰面积。计算加样回收率,结果见表1。
3 讨 论
3.1 通过紫外检测波长(190-350nm),发现芍药苷对照品溶液在229.5nm处有最大吸收波长,故实验中的检测波长选为230nm。
3.2 采用HPLC法测定芍药苷含量的文献[1-6]曾报道过多种流动相。通过大量的初期试验发现不同配比的流动相出峰时间不同,用甲醇-水(30:70)作为流动相时,出峰时间适宜,峰形也较好,即节省了时间,也节省了流动相的用量,经济适用。
3.3 本文采用HPLC法测定乳痛宁糖浆中芍药苷的含量,回收率和含量测定的结果表明,此方法操作简便,重现性好,准确快速,较符合医院制剂快检的要求。
参考文献
[1] 中国药典[M](一部) 2005年版.化学工业出版社,2005:109.
[2] 中国药典[M](一部) 2005年版.化学工业出版社,2005:89.
[3] 中国药典[M](一部) 2005年版.化学工业出版社,2005:28.
[4] 赵军,张茂慧,李景庄,李献林.乳痛宁颗粒的质量标准研究.中国新药杂志,2006,18:17-19.
[5] 王述蓉,叶利明,陈聪等,HPLC法测定强肝糖浆中芍药苷的含量.药物分析杂志,2006,26(9):1331-1332.
[6] 郭维儿,倪晟.HPLC法测定复元浓缩片中芍药苷的含量.中成药,2004,26(8):附18.
【关键词】 HPLC法;芍药苷;乳痛宁糖浆;含量测定
doi:10.3969/j.issn.1004-7484(x).2014.04.017
文章编号:1004-7484(2014)-04-1817-02
【Abstract】Objective To establish a method of determination of paeoniflorin in Rutongning syrup by HPLC.Methods The contents of paeoniflorin in Rutongning syrup were determination by HPLC.Results The calibration curre is linear in the range 16.68-122.32μg/mL(r=0.9998,n=7) for Rutongning syrup.The average recovery was 99.30﹪.RSD=0.88﹪(n=9).Conclusion The method is sample、quick、accurate and with a reproducibility and can be used for the quality control of the preparation.
【Key words】 Rutongning syrup;paeoniflorin;HPLC;determination
乳痛宁糖浆是新疆医科大学第一附属医院自制制剂,由赤芍(芍药)、柴胡、香附、锁阳、当归、川芎等13味中药制成,具有疏肝益肾、行气活血、消痹止痛的功效,主要用于治疗妇女乳腺小叶增生、乳房肿块及乳房肿痛,我院临床广泛适用,疗效确定。本文采用HPLC法对乳痛宁糖浆中芍药苷进行含量测定,方法简便、快捷、准确、重现性好、干扰少,符合医院制剂的检测要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Peseries200高效液相测谱仪(美国PE公司);BS-224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系数有限公司);UC-1000型超声波清洗机(宁波科生仪器厂);紫外分光光度仪1700UV岛津(日本岛津公司)。
1.2 试药 芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号110796-200423);甲醇(色谱纯),超纯水;乳痛宁糖浆(新疆医科大学第一附屬医院药学部,批号080303,080324,080325)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:以C18化学键合硅胶(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水|(30:70);流速:1.0ml·min-1;柱温:25℃;检测波长:230nm;进样量:10μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品13.90mg,置于25ml棕色容量瓶中,加甲醇溶液稀释至刻度,定容。即配成每ml含556.00μg芍药苷对照品浓贮备溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品10ml,置50ml棕色量瓶中,用甲醇溶液稀释至刻度,定容,超声处理40min,用0.45μm微孔滤膜器过滤,即得。
2.4 干扰试验 按处方配置却赤芍的乳痛宁糖浆阴性样品,按照“2.3”项下方法制备成阴性对照品溶液,与“2.2”、“2.3”项下溶液分别进样。结果,供试品色谱柱中在与对照品色谱柱相同保留时间处有相同色谱峰;阴性对照品在此无干扰。色谱见图1。
2.5 线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液0.75、1.0、2.5、3.0、3.5、5.0、5.5ml分别置于25ml棕色量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜器过滤,分别进样,记录色谱图。以芍药苷的浓度(X)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=13975X-29298.01(r=0.9998)。结果表明,芍药苷浓度在16.68-122.32μg·ml-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 精密吸取浓度为180.00μg·ml的对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件连续进样共5次。记录峰面积。结果,峰面积的平均值为414797.944,RSD=1.79%(n=5),表明仪器精密度良好。
2.7 重现性试验 取样品(批号:080325),按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定峰面积,计算芍药苷的含量,结果,平均含量为74.01μg·ml-1,RSD=0.84%(n=6)表明该方法重现性良好。
2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(080325)在室温下放置,过045μg微孔滤膜,分别于0、2、4、6、8、24h测定含量,结果,RSD为1.84%(n=6),表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.9 加样回收率试验 精密吸取已知含量样品(批号:080325)1mL,置10mL棕色容量瓶中,分别精密加入芍药苷对照品(180.00μg·mL-1)1.5,2.0,2.5mL,按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.4.1”项下色谱条件测定峰面积。计算加样回收率,结果见表1。
3 讨 论
3.1 通过紫外检测波长(190-350nm),发现芍药苷对照品溶液在229.5nm处有最大吸收波长,故实验中的检测波长选为230nm。
3.2 采用HPLC法测定芍药苷含量的文献[1-6]曾报道过多种流动相。通过大量的初期试验发现不同配比的流动相出峰时间不同,用甲醇-水(30:70)作为流动相时,出峰时间适宜,峰形也较好,即节省了时间,也节省了流动相的用量,经济适用。
3.3 本文采用HPLC法测定乳痛宁糖浆中芍药苷的含量,回收率和含量测定的结果表明,此方法操作简便,重现性好,准确快速,较符合医院制剂快检的要求。
参考文献
[1] 中国药典[M](一部) 2005年版.化学工业出版社,2005:109.
[2] 中国药典[M](一部) 2005年版.化学工业出版社,2005:89.
[3] 中国药典[M](一部) 2005年版.化学工业出版社,2005:28.
[4] 赵军,张茂慧,李景庄,李献林.乳痛宁颗粒的质量标准研究.中国新药杂志,2006,18:17-19.
[5] 王述蓉,叶利明,陈聪等,HPLC法测定强肝糖浆中芍药苷的含量.药物分析杂志,2006,26(9):1331-1332.
[6] 郭维儿,倪晟.HPLC法测定复元浓缩片中芍药苷的含量.中成药,2004,26(8):附18.