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【摘要】 目的：探讨原发性肝癌（PHC）患者血管内皮生长因子（VEGF）活性和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的变化及临床意义。方法：选择63例PHC患者，采用2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的PHC诊断及分期标准分为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，另选取30例健康体检者作为对照组，检测所有受试者VEGF、TNF-α表达的情况。结果：不同分期PHC患者血清中VEGF、TNF-α含量均显著高于对照组（P<0.01）； Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PHC患者VEGF、TNF-α含量逐渐增高；Ⅱ期VEGF、TNF-α含量明显低于Ⅲ期 （P<0.05）；Ⅳ期VEGF、TNF-α水平显著高于Ⅱ期 （P<0.01）。结论：VEGF、TNF-α的表达水平可以作为判断PHC发生发展、分化程度及转移的检测指标。
【关键词】 原发性肝癌； 肝癌分期； 血管内皮因子； 肿瘤坏死因子-α
【Abstract】 Objective：To investigate the levels change and clinical significance of vascular endothelial growth factor（VEGF） activity and tumor necrosis factor alpha（TNF-α） in primary liver cancer（PHC）.Method：A total of 63 patients with PHC were chosen，using Chinese anti-cancer association professional committee of liver cancer in 2001 formulated the PHC diagnosis and staging of the standard is divided into phase Ⅱ，phase Ⅲ，Ⅳ period，and the other 30 cases of healthy physical examination were selected as blank control group， VEGF and TNF-α of all objects were compared.Result：Different stages PHC patients serum VEGF and TNF-αlevels were significantly higher than that of blank control group（P<0.01）.Phase Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ period PHC patients with VEGF，TNF-αcontent increased gradually.Phase Ⅱ VEGF，TNF-αwere significantly lower than those of phase Ⅲ（P<0.05）.Phase Ⅳ VEGF and TNF-α were significantly higher than those of phase Ⅱ（P<0.01）.Conclusion：The expression of VEGF and TNF-α can be used as a judgment of PHC detection index of the development，differentiation and metastasis.
【Key words】 Primary liver cancer； Cancer of liver stages； Vascular endothelial factor； Tumor necrosis factor-α
First-author’s address：Shenzhen City Baoan District Songgang People’s Hospital，Shenzhen 518105，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.21.031
原发性肝癌（primary hepatic cancer，PHC）是指发生在肝细胞或肝内胆管细胞的肿瘤[1]。新生血管的形成对于肝癌细胞的恶性转化及远处扩散至关重要[2]，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF） 是目前已知的、调节血管形成的关键因子，特异性很高[3]。肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是重要的前炎性细胞因子，具有抗肿瘤作用[4-5]。本研究通过观察PHC患者血清VEGF及TNF-α水平，探讨VEGF和TNF-α水平的变化与PHC临床分期的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2011年8月-2015年8月本院收治的63例PHC患者，均经AFP及肝脏CT证实为PHC，其中男43 例，女20例，年龄28～79岁，平均（ 51.27±7.43）岁。采用2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的PHC诊断及分期标准[6]确诊肝癌并分为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，所有患者受试前均未接受化学治疗、放射治疗、免疫治疗和手术治疗。其中肝癌Ⅱ期14例，Ⅲ期26例，Ⅳ期23例。随机抽选健康体检者30例作为对照组，其中男16例，女14例。年龄26～77岁，平均（ 53.75±7.32） 岁。经实验室检查无乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等病毒感染，无心脏病、慢性支气管肺炎等重要脏器疾病，无肿瘤家族病史。各组研究对象性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 检测方法 清晨采集受试者空腹静脉血5 mL，分离血清，分装，置-20 ℃冰箱保存备用。根据说明书上的步骤进行各项检测。采用定量ELISA 法测定血清中VEGF的含量，试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供；采用酶联免疫吸附法测定血清中TNF-α含量，试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；操作严格按照产品说明书进行。所有标本均为复管检测。 1.3 统计学处理 应用SPSS 18.0 统计学软件处理数据，计量资料以（x±s）表示，两两比较采用t检验，计数资料比较采用 字2检验；检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
不同分期PHC患者血清中VEGF、TNF-α含量均显著高于对照组（P<0.01）；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PHC患者VEGF、TNF-α含量逐渐增高，Ⅱ期VEGF、TNF-α含量明显低于Ⅲ期 （P<0.05）；Ⅳ期VEGF、TNF-α水平显著高于Ⅱ期 （P<0.01）。见表1。
3 讨论
近年来VEGF、TNF-α与原发性肝癌（primary hepatic cancer，PHC）的关系正受到越来越多的关注。肿瘤的发展与血管的生成有着密切的关系，VEGF是高度保守的同源二聚体[7]，是目前发现的最强烈的血管生成因子，能促进血管生长，能刺激内皮细胞等其他细胞迁移和增殖，提高内皮通透性[8]。PHC过程与新生血管的生成密切相关，血清VEGF水平与PHC密切相关[9]，诱导肿瘤血管生成，维持肿瘤的继续生长[10-12]，VEGF表达增加促进了PHC的发展[13-14]。
TNF-α是一种重要的促炎性细胞因子，由具有吞噬效应的免疫细胞和激活的淋巴细胞释放，具有广泛的生物活性，诱导免疫细胞产生和释放白细胞介素类、干扰素等细胞因子，并可诱导肝细胞产生急性期反应蛋白，具有杀伤或者抑制肿瘤细胞、吞噬中性粒细胞和抗感染的能力，在正常值的情况下，对机体有利；若释放过多，则可导致机体的病理性损伤[15-16]。在分子水平，刺激产生有助于肿瘤生长的物质，有可能导致肿瘤的生物学行为恶化[17]。
研究证实，在PHC中肿瘤的生长必然需要血管的生成，而VEGF在肝癌患者中的表达显著高于患有肝脏疾病和正常人[18-20]。本研究结果显示，PHC患者的 VEGF、TNF-α水平较对照组显著升高。随着PHC分期的进展，不同分期PHC患者血清中VEGF、TNF-α含量均显著高于健康对照组（P<0.01），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PHC患者VEGF、TNF-α含量逐渐增高；Ⅱ期VEGF、TNF-α含量明显低于Ⅲ期 （P<0.05）；Ⅳ期VEGF、TNF-α水平显著高于Ⅱ期 （P<0.01），提示血清VEGF、TNF-α水平与PHC的形成和发展有关。本研究结果还发现，正常健康人群血清VEGF、TNF-α含量较低，而PHC患者VEGF、TNF-α水平均显著升高，反映了肝组织细胞不断受肿瘤细胞迁移和增殖的诱导后，不断产生大量VEGF、TNF-α，并在局部发挥其生物学作用，加重了PHC的进一步恶化；随着VEGF、TNF-α水平的进一步升高，从而单独或共同发挥持续性肝损害作用，促进PHC形成和发展。本研究结果显示，VEGF、TNF-α水平与PHC严重程度呈正相关，与文献[21]报道相符。
综上所述，VEGF和TNF-α作为PHC发生发展的网络调控因子，对PHC患者的肿瘤细胞迁移和增殖发挥重要作用，临床医师可考虑将TNF-α和IL-1β作为生物治疗的靶点。
参考文献
[1] Siegel R，Ward E，Brawley O，et al.Cancer statistics，2011：the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths[J].CA Cancer J Clin，2011，61（4）：212-236.
[2] Iavarone M，Lampertico P，Iannuzzi F，et al.Increased expression of vascular endothelial growth factor in small hepatocellular carcinoma[J].J Viral Hepat，2007，14（2）：133-139.
[3] Hamma-Kourbali Y，Vassy R，Starzec A，et al.Vascular endothelial growth factor 165 （VEGF（165）） activities are inhibited by carboxymethyl benzylamide dextran that competes for heparin binding to VEGF （165） and VEGF（165）.KDR Complexes[J].J Biol Chem，2001，276（43）：39 748-39 754.
[4] Kurdowska A，Noble J M，Grant L S，et al.Anti-interleukin-8 autoantibodies in patients at risk for acute respiratory distress syndrome[J].Crit Care Med，2002，30（10）：2335-2337.
[5]赵文鹏，苗战会，路平，等.TNF-α基因多态性与食管癌相关性的研究[J].中国医疗前沿，2010，5（7）：6-8.
[6]中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准[J].中华肝脏病杂志，2001，9（6）：324.
[7] Weidemann A K，Crawshaw A A，Byrne E，et al.Vascular endothelial growth factor inhibitors：investiga tional therapies for the treatment of psoriasis[J].Clin Cosmet Investig Dermatol，2013，6：233-244 [8] Wagatsuma A.Endogenous expression of angiogenesis related factors in response to muscle injury[J].Mol Cell Biochem，2007，298（1/2）：151-159.
[9] Masuzaki R，Karp S J，Omata M.New serum markers of hepatocellular carcinom[J].Semin Oncol，2012，39（4）：434-439.
[10]王彦敏.血管生成因子VEGF研究进展[J].河北医药，2010，38（11）：804-807.
[11] Coristophe C，Barbu V，Wendum D，et al.Hypoxia induced VEGF and collagen I expressions are associated with angiogenes is and fibrogenes is in experimental primary hepatic carcinoma[J].Hepatology，2002，35（5）：1010-1021.
[12]陶斌胜，熊茂明，曹立宇.肝癌组织中MIF、TNF-α的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2011，27（11）：1177-1180.
[13]向保云，李红德，徐江海，等.肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β在慢性乙型肝炎和原发性肝癌患者血清及肝组织中的表达[J].新乡医学院学报，2014，31（12）：999-1001.
[14] Zhao J，Hu J，Cai J，et al.Vascular endothelial growth factor expression in serum of patients with hepatocellular carcinoma[J].Chinese Medical Journal，2003，116（5）：772-776.
[15]王小银，朱金水，许志朋，等.白细胞介素-18、肿瘤坏死因子与肝癌患者预后的相关性[J].肝脏，2011，16（1）：56-57.
[16]王洪良，马良，钟鉴宏，等.TACE联合艾迪注射液治疗中晚期肝癌疗效的系统评价[J].现代中西医结合杂志，2013，22（12）：342-343.
[17]林奕堂.疏肝健脾、解毒化瘀法治疗原发性肝癌80例疗效观察[J].中国医药指南，2012，10（33）：91-93.
[18]曾春生，蔡联明，李金伟，等.金龙胶囊对原发性肝癌患者介入治疗后生存质量的影响[J].中国肿瘤临床，2012，39（22）：312-314.
[19]孙志强，刘正丽.艾迪注射液联合肝动脉化疗栓塞治疗中晚期原发性肝癌临床疗效观察[J].中国实用医药，2012，7（33）：777-789.
[20]田永贞，李红雨，杜洪涛.中西医结合治疗肝癌疗效研究[J].中医学报，2012，27（10）：68-70.
[21]刘宏，朱云杰.丹参饮联合奥沙利铂、5-氟尿嘧啶介入治疗中晚期原发性肝癌随机平行对照研究[J].实用中医内科杂志，2012，26（10）：89-90.
（收稿日期：2016-04-20） （本文编辑：程旭然）
【关键词】 原发性肝癌； 肝癌分期； 血管内皮因子； 肿瘤坏死因子-α
【Abstract】 Objective：To investigate the levels change and clinical significance of vascular endothelial growth factor（VEGF） activity and tumor necrosis factor alpha（TNF-α） in primary liver cancer（PHC）.Method：A total of 63 patients with PHC were chosen，using Chinese anti-cancer association professional committee of liver cancer in 2001 formulated the PHC diagnosis and staging of the standard is divided into phase Ⅱ，phase Ⅲ，Ⅳ period，and the other 30 cases of healthy physical examination were selected as blank control group， VEGF and TNF-α of all objects were compared.Result：Different stages PHC patients serum VEGF and TNF-αlevels were significantly higher than that of blank control group（P<0.01）.Phase Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ period PHC patients with VEGF，TNF-αcontent increased gradually.Phase Ⅱ VEGF，TNF-αwere significantly lower than those of phase Ⅲ（P<0.05）.Phase Ⅳ VEGF and TNF-α were significantly higher than those of phase Ⅱ（P<0.01）.Conclusion：The expression of VEGF and TNF-α can be used as a judgment of PHC detection index of the development，differentiation and metastasis.
【Key words】 Primary liver cancer； Cancer of liver stages； Vascular endothelial factor； Tumor necrosis factor-α
First-author’s address：Shenzhen City Baoan District Songgang People’s Hospital，Shenzhen 518105，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.21.031
原发性肝癌（primary hepatic cancer，PHC）是指发生在肝细胞或肝内胆管细胞的肿瘤[1]。新生血管的形成对于肝癌细胞的恶性转化及远处扩散至关重要[2]，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF） 是目前已知的、调节血管形成的关键因子，特异性很高[3]。肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是重要的前炎性细胞因子，具有抗肿瘤作用[4-5]。本研究通过观察PHC患者血清VEGF及TNF-α水平，探讨VEGF和TNF-α水平的变化与PHC临床分期的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2011年8月-2015年8月本院收治的63例PHC患者，均经AFP及肝脏CT证实为PHC，其中男43 例，女20例，年龄28～79岁，平均（ 51.27±7.43）岁。采用2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的PHC诊断及分期标准[6]确诊肝癌并分为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，所有患者受试前均未接受化学治疗、放射治疗、免疫治疗和手术治疗。其中肝癌Ⅱ期14例，Ⅲ期26例，Ⅳ期23例。随机抽选健康体检者30例作为对照组，其中男16例，女14例。年龄26～77岁，平均（ 53.75±7.32） 岁。经实验室检查无乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等病毒感染，无心脏病、慢性支气管肺炎等重要脏器疾病，无肿瘤家族病史。各组研究对象性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 检测方法 清晨采集受试者空腹静脉血5 mL，分离血清，分装，置-20 ℃冰箱保存备用。根据说明书上的步骤进行各项检测。采用定量ELISA 法测定血清中VEGF的含量，试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供；采用酶联免疫吸附法测定血清中TNF-α含量，试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；操作严格按照产品说明书进行。所有标本均为复管检测。 1.3 统计学处理 应用SPSS 18.0 统计学软件处理数据，计量资料以（x±s）表示，两两比较采用t检验，计数资料比较采用 字2检验；检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
不同分期PHC患者血清中VEGF、TNF-α含量均显著高于对照组（P<0.01）；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PHC患者VEGF、TNF-α含量逐渐增高，Ⅱ期VEGF、TNF-α含量明显低于Ⅲ期 （P<0.05）；Ⅳ期VEGF、TNF-α水平显著高于Ⅱ期 （P<0.01）。见表1。
3 讨论
近年来VEGF、TNF-α与原发性肝癌（primary hepatic cancer，PHC）的关系正受到越来越多的关注。肿瘤的发展与血管的生成有着密切的关系，VEGF是高度保守的同源二聚体[7]，是目前发现的最强烈的血管生成因子，能促进血管生长，能刺激内皮细胞等其他细胞迁移和增殖，提高内皮通透性[8]。PHC过程与新生血管的生成密切相关，血清VEGF水平与PHC密切相关[9]，诱导肿瘤血管生成，维持肿瘤的继续生长[10-12]，VEGF表达增加促进了PHC的发展[13-14]。
TNF-α是一种重要的促炎性细胞因子，由具有吞噬效应的免疫细胞和激活的淋巴细胞释放，具有广泛的生物活性，诱导免疫细胞产生和释放白细胞介素类、干扰素等细胞因子，并可诱导肝细胞产生急性期反应蛋白，具有杀伤或者抑制肿瘤细胞、吞噬中性粒细胞和抗感染的能力，在正常值的情况下，对机体有利；若释放过多，则可导致机体的病理性损伤[15-16]。在分子水平，刺激产生有助于肿瘤生长的物质，有可能导致肿瘤的生物学行为恶化[17]。
研究证实，在PHC中肿瘤的生长必然需要血管的生成，而VEGF在肝癌患者中的表达显著高于患有肝脏疾病和正常人[18-20]。本研究结果显示，PHC患者的 VEGF、TNF-α水平较对照组显著升高。随着PHC分期的进展，不同分期PHC患者血清中VEGF、TNF-α含量均显著高于健康对照组（P<0.01），Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PHC患者VEGF、TNF-α含量逐渐增高；Ⅱ期VEGF、TNF-α含量明显低于Ⅲ期 （P<0.05）；Ⅳ期VEGF、TNF-α水平显著高于Ⅱ期 （P<0.01），提示血清VEGF、TNF-α水平与PHC的形成和发展有关。本研究结果还发现，正常健康人群血清VEGF、TNF-α含量较低，而PHC患者VEGF、TNF-α水平均显著升高，反映了肝组织细胞不断受肿瘤细胞迁移和增殖的诱导后，不断产生大量VEGF、TNF-α，并在局部发挥其生物学作用，加重了PHC的进一步恶化；随着VEGF、TNF-α水平的进一步升高，从而单独或共同发挥持续性肝损害作用，促进PHC形成和发展。本研究结果显示，VEGF、TNF-α水平与PHC严重程度呈正相关，与文献[21]报道相符。
综上所述，VEGF和TNF-α作为PHC发生发展的网络调控因子，对PHC患者的肿瘤细胞迁移和增殖发挥重要作用，临床医师可考虑将TNF-α和IL-1β作为生物治疗的靶点。
参考文献
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[12]陶斌胜，熊茂明，曹立宇.肝癌组织中MIF、TNF-α的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2011，27（11）：1177-1180.
[13]向保云，李红德，徐江海，等.肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β在慢性乙型肝炎和原发性肝癌患者血清及肝组织中的表达[J].新乡医学院学报，2014，31（12）：999-1001.
[14] Zhao J，Hu J，Cai J，et al.Vascular endothelial growth factor expression in serum of patients with hepatocellular carcinoma[J].Chinese Medical Journal，2003，116（5）：772-776.
[15]王小银，朱金水，许志朋，等.白细胞介素-18、肿瘤坏死因子与肝癌患者预后的相关性[J].肝脏，2011，16（1）：56-57.
[16]王洪良，马良，钟鉴宏，等.TACE联合艾迪注射液治疗中晚期肝癌疗效的系统评价[J].现代中西医结合杂志，2013，22（12）：342-343.
[17]林奕堂.疏肝健脾、解毒化瘀法治疗原发性肝癌80例疗效观察[J].中国医药指南，2012，10（33）：91-93.
[18]曾春生，蔡联明，李金伟，等.金龙胶囊对原发性肝癌患者介入治疗后生存质量的影响[J].中国肿瘤临床，2012，39（22）：312-314.
[19]孙志强，刘正丽.艾迪注射液联合肝动脉化疗栓塞治疗中晚期原发性肝癌临床疗效观察[J].中国实用医药，2012，7（33）：777-789.
[20]田永贞，李红雨，杜洪涛.中西医结合治疗肝癌疗效研究[J].中医学报，2012，27（10）：68-70.
[21]刘宏，朱云杰.丹参饮联合奥沙利铂、5-氟尿嘧啶介入治疗中晚期原发性肝癌随机平行对照研究[J].实用中医内科杂志，2012，26（10）：89-90.
（收稿日期：2016-04-20） （本文编辑：程旭然）