【摘 要】
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目的:探讨化瘀祛痰方含药血清通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用及相关机制.方法
【机 构】
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辽宁中医药大学 附属医院 辽宁 沈阳 110032;辽宁中医药大学 附属第二医院 辽宁 沈阳 110034;辽宁中医药大学 辽宁 沈阳 110847;辽宁中医药大学 中医脏象理论及应用教育部重点实验室
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目的:探讨化瘀祛痰方含药血清通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用及相关机制.方法:体外培养HAECs,随机分为对照组、ox-LDL组、化瘀祛痰方组.细胞增殖毒性检测(CCK-8)法筛选诱导HAECs内皮损伤的最佳ox-LDL浓度.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PI3K/AKT信号通路及自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ比值的表达情况.免疫荧光法检测LC3表达情况.结果:CCK-8结果显示50 mg·L-1 ox-LDL作用时,细胞活力最适宜.Western blot结果显示,与对照组相比,ox-LDL组PI3K和AKT蛋白磷酸化水平明显减少(P<0.05),Beclin-1蛋白和LC3-Ⅰ/Ⅱ比值表达水平明显增加(P<0.05),自噬水平增加;与ox-LDL组相比,化瘀祛痰方组PI3K和AKT蛋白磷酸化水平明显增加(P<0.05),Beclin-1蛋白和LC3-Ⅰ/Ⅱ比值表达水平明显减少(P<0.05),化瘀祛痰方可有效保护血管内皮细胞,自噬水平降低.免疫荧光结果显示,与对照组相比,ox-LDL组LC3蛋白累计光密度(IOD)明显增加(P<0.05),自噬水平增加;与ox-LDL组相比,化瘀祛痰方组LC3的IOD明显降低(P<0.05),自噬水平降低.结论:化瘀祛痰方通过调节PI3K/AKT信号通路抑制内皮细胞的过度自噬,减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤,防治动脉粥样硬化.
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