将禽呼肠孤病毒(ARV)S1733株进行鸡胚增殖,增殖的病毒经浓缩、纯化后灭活,按每鼠100μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠5次,每次间隔7 d,第五次免疫3 d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合及筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,用克隆的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。抗体经Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光等方法进行检测验证。经验证的的单克隆抗体作为包被抗体,建立双抗体夹心ELISA方法检测ARV。对建立的方法进行特异性和敏感性试验。结果:筛选成功获得1株能稳定分泌抗ARV的单克隆抗体杂交瘤细胞株SF6-3 K3;免疫荧光和Dot-ELISA方法证明该单克隆抗体能特异性地检测ARV;间接ELISA方法测定腹水单克隆抗体效价达105以上,经亚型测定为IgG1,并且具有良好的特异性;用单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法特异性强,与对照的毒株新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)无交叉反应,检测的敏感性为5×10-5μg/μL的病毒量。结果表明,本试验建立的夹心ELISA检测ARV方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于ARV的检测。