【摘 要】
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目的 体外研究小鼠骨髓诱导巨噬细胞BMDMs吞噬pRBCs后能否形成LC3相关吞噬(LC3-associated phagocytosis,LAP)及其在调节BMDMs分泌炎症因子中的作用.方法 构建BMDMs与pRBCs体外共孵育及吞噬研究平台.体外诱导小鼠BMDMs,用CFSE标记P.y 17XNL感染的小鼠红细胞(parasitized red blood cells,pRBCs),共孵育后采用流式细胞术观察BMDMs对pRBCs的吞噬效率并选定最佳条件,用CBA法检测培养上清中炎症因子浓度.随后分
【机 构】
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400038重庆,陆军军医大学基础医学院病原生物学教研室
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目的 体外研究小鼠骨髓诱导巨噬细胞BMDMs吞噬pRBCs后能否形成LC3相关吞噬(LC3-associated phagocytosis,LAP)及其在调节BMDMs分泌炎症因子中的作用.方法 构建BMDMs与pRBCs体外共孵育及吞噬研究平台.体外诱导小鼠BMDMs,用CFSE标记P.y 17XNL感染的小鼠红细胞(parasitized red blood cells,pRBCs),共孵育后采用流式细胞术观察BMDMs对pRBCs的吞噬效率并选定最佳条件,用CBA法检测培养上清中炎症因子浓度.随后分离诱导巨噬细胞ATG5条件缺失小鼠(Lyz2-Cre-ATG5flox/flox)来源的BMDMs,观察其吞噬pRBCs后胞内ATG5缺失对其分泌炎症因子的影响,通过免疫荧光染色及共聚焦观察ATG5缺失对BMDMs吞噬pRBCs后,胞内LC3-Ⅱ与pRBCs共定位的影响.结果 体外成功诱导BMDMs,流式细胞术检测证实巨噬细胞纯度＞95％.在BMDMs与pRBCs按照1:20孵育下,随孵育时间延长,吞噬比例显著增加,其中孵育4h时,吞噬比例最高(＞50％).CBA炎症因子检测后发现,BMDMs吞噬pRBCs后,其IL-6、MCP-1及TNF-α的分泌增强.进一步发现,与对照组相比,ATG5-/-BMDMs吞噬pRBCs后能显著增强IL-6和TNF-α的分泌.免疫荧光及共聚焦观察发现,ATG5缺失能明显抑制BMDMs吞噬pRBCs后胞内LC3-Ⅱ与pRBCs共定位情况.结论 巨噬细胞吞噬pRBCs后,可能通过LAP依赖方式抑制其胞内炎症因子的分泌.
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