【摘 要】
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目的 表达和纯化四种单链DNA结合(SSB)蛋白,并探讨其对HCV RNA的绑定.方法 构建四种SSB蛋白的表达质粒,各简写为TTH,SSOB,KOD和BL21.TTH转化BL21 (DE3)感受态细胞,SSOB,KOD和BL21分别转化Transetta(DE3),IPTG诱导表达.镍柱亲和层析纯化,经SDS-PAGE检测表达纯化后的SSB蛋白.并通过TAE电泳检测其对HCV RNA的绑定情况.
【机 构】
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325035温州医科大学检验医学院生命科学院,浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室,325035温州医科大学检验医学院生命科学院
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目的 表达和纯化四种单链DNA结合(SSB)蛋白,并探讨其对HCV RNA的绑定.方法 构建四种SSB蛋白的表达质粒,各简写为TTH,SSOB,KOD和BL21.TTH转化BL21 (DE3)感受态细胞,SSOB,KOD和BL21分别转化Transetta(DE3),IPTG诱导表达.镍柱亲和层析纯化,经SDS-PAGE检测表达纯化后的SSB蛋白.并通过TAE电泳检测其对HCV RNA的绑定情况.结果 四种SSB蛋白表达质粒转入合适的感受态细胞,IPTG诱导,纯化后经SDS-PAGE电泳,分别发现单一预期大小的蛋白条带,说明我们成功表达纯化出较高纯度的SSB蛋白.并与HCV RNA孵育后,经TAE电泳后发现四种SSB蛋白均能绑定HCV RNA.结论 我们表达和纯化了四种SSB蛋白,并首次发现SSB蛋白绑定HCV RNA,为未来研究SSB蛋白在RNA上的应用提供一个重要基础。
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