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利用30L发酵罐，研究了黄色短杆菌TK0303生产L-亮氨酸的发酵工艺。考察了初始葡萄糖浓度和发酵过程中3种补料策略（分批间歇流加补料、恒葡萄糖浓度流加补料和DO一在线识别流加补料）对菌体生物量、L-亮氨酸产量、副产物含量及糖酸转化率的影响。最终确定：分批补料发酵的初始葡萄糖浓度为60g／L，葡萄糖补加采用DO-在线识别流加方式。根据溶氧响应信号的特征反馈控制葡萄糖的流加速率，可实现葡萄糖的限制培养，有效减少了发酵副产物的含量，菌体生物量和L-亮氨酸产量得到显著提高，分别为21．8g／L和41．3g／L，