【摘 要】
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目的建立FKBP12蛋白(FK506 binding-protein 12,基因名FKBP1A)RNA干扰和回复表达的人肺癌细胞系A549,并初步探索FKBP12的功能。方法设计3条核心序列位于FKBP1A 3’UTR区域的s
【机 构】
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上海交通大学医学院/中科院上海生命科学研究院健康科学研究所干细胞和肿瘤信号转导研究组
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(“973”计划)(2011CB510105)~~
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目的建立FKBP12蛋白(FK506 binding-protein 12,基因名FKBP1A)RNA干扰和回复表达的人肺癌细胞系A549,并初步探索FKBP12的功能。方法设计3条核心序列位于FKBP1A 3’UTR区域的siRNA,它们仅靶向内源性的FKBP12。利用p LKO.1-puro载体包装相应的shRNA慢病毒感染A549,得到FKBP12表达调低的细胞系。使用带neo基因筛选标记的pc DNA3.1载体回复表达FKBP12,并筛选得到不受shRNA干扰的回复表达细胞系。用实时荧光定量PCR和Western blotting检测调低和回复表达效果,并初步分析细胞系表型。结果 FKBP12在mRNA和蛋白质水平上的表达均被抑制,干扰效率在75%以上(P<0.01)。FKBP12不影响A549的细胞形态和增殖效率,而下调m TORC1(mammalian target of Rapamycin complex 1)下游转录调控相关蛋白4E-BP1(e IF4E-binding protein 1)的表达。结论成功构建了FKBP12蛋白敲低和回复表达的A549细胞系,为后续探究FKBP12的功能奠定了基础。
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