【摘 要】
：
目的 探索优化PCR及测序法检测DNA甲基化的实验条件,检测肺癌hsa-mir-34b(mir-34b)基因启动子DNA甲基化谱.方法 肺癌细胞株A549 DNA进行亚硫酸盐处理后,设计引物扩增mir-34b
【机 构】
：
广东省肺癌研究所,广东省医学科学院,广东省人民医院医学研究中心
论文部分内容阅读
目的 探索优化PCR及测序法检测DNA甲基化的实验条件,检测肺癌hsa-mir-34b(mir-34b)基因启动子DNA甲基化谱.方法 肺癌细胞株A549 DNA进行亚硫酸盐处理后,设计引物扩增mir-34b基因启动子序列,使用普通PCR、巢式PCR和降落(Touchdown)PCR方法以及不同DNA聚合酶进行扩增,甲基化谱检测采用PCR直接测序和克隆后测序两种方法.结果 降落 PCR与巢式PCR方法相结合优于普通PCR及单独的巢式PCR或降落 PCR.HotStart酶优于普通Taq酶及Ex Taq酶.直接PCR测序法的测序图普遍出现套峰难以判读,PCR产物克隆后测序可见清晰的测序峰,甲基化位点可明确判读,并可以结合测序克隆数目提高甲基化检测敏感度.结论 对于重亚硫酸盐处理的DNA甲基化状态检测,推荐使用HotStart酶、降落 PCR与巢式PCR相结合、克隆测序法检测基因甲基化谱,序列图明确且敏感度高.
其他文献
近年来,协同通信在无线传感器网络中取得了很大的应用,重点分析和研究了一种基于低功耗自适应集簇分层型协议(LEACH)的协同通信算法;在该算法中,通过选择合适的协同节点来发
无线自组织网络(Ad Hoc Network)作为一种对等无线网络,在军事、传感器网络等众多场合有着极其重要的应用。动态源路由(DSR)协议是Ad Hoc网络最经典的协议之一,当前大多数对D
现代办公建筑摒弃旧的空间组合,焕发出新的活力.如何以形造势,使办公空间有新的创意,是值得我们设计人员思索的.
国有企业的改革是我国经济体制改革的中心环节,本文回顾了我国国企改革实践的几个阶段,认为能否真正建立现代企业制度是国有企业的改革成功的关键。同时分析了目前我国在建立
目的 探讨神经外科手术理想的麻醉方法.方法 选择ASA分级Ⅰ～Ⅱ级择期行神经外科手术患者120例,按随机数字表法分为七氟烷组及普鲁泊福组,每组60例,比较两组平均动脉压、心率、
构建研究型大学本科教学的实验教学体系,是建设研究型大学、培养具有创新能力的高素质人才的核心内容.通过更新教学理念,东南大学基础医学实验教学中心改革了传统的机能学科
目的:维医沙疗对股骨压缩和拉伸力学性能的影响.方法:压缩实验:30只新西兰兔随机分为沙疗组14只、药物对照组10只及正常组6只.对药物对照组和沙疗组的兔子的右膝关节腔内注射
探讨在±800kV直流输电线路开展带电作业的方法,实践了2种等电位作业人员进出±800kV直流输电线路的方法,并为作业人员提供了专用防护服和电位转移杆,实现了±800kV直流输电
从国际公路承包的投标考察和投标决策,介绍国际公路工程承包风险管理的概念和方法
目的观察高度白酒和红葡萄酒对肝脏的不同作用;分别从能量代谢和氧化应激两个方面阐述高度白酒可引起小鼠的酒精性肝损伤;同时探讨槲芪散治疗酒精性肝损伤的药理学机制。方法