慢病毒介导的基质金属蛋白酶2基因沉默抑制喉癌侵袭生长的实验研究

来源 :中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hao8035
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目的探讨siRNA(小干扰RNA)重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用。方法采用RNA干扰技术,将MMP-2基因siRNA的重组慢病毒(MMP-2-RNAi—Lentivirus)转染喉鳞癌Hep-2细胞,并运用蛋白印记法检测Hep-2细胞MMP-2基因的蛋白表达;通过博伊登(Boyden)侵袭小室观察MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后喉癌细胞侵袭能力的变化。构建喉癌移植瘤裸鼠模型,瘤内注射MMP-2-RNAi—Lentivirus,观察抑瘤效果;透射电镜观察肿瘤形态;运用免疫组化方法检测移植瘤中增殖细胞核抗原的表达,以评估细胞增殖的情况。结果MMP-2-RNAi—Lentivirus能高效地转染靶细胞,转染效率在90%以上。蛋白印迹法检测显示,转染后的Hep-2细胞中MMP-2蛋白表达阴性。侵袭实验显示,MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后的实验组Hep-2细胞中穿过人工基底膜的平均细胞数(x^-±s,以下同)为(12±4)个,明显少于空载体对照组的(35±6)个(t=14.492,P<0.01)。体内实验显示,MMP-2-RNAi—Lentivirus瘤内注射后,裸鼠移植瘤平均重量和平均体积均明显小于对照组,抑瘤率为44.2%。透射电镜观察到MMP-2-RNAi—Lentivirus治疗组肿瘤细胞侵袭表型降低,治疗组肿瘤增殖细胞核抗原指数(49.588±6.995)也明显小于对照组(71.434±7.043,t=9.573,P<0.01)。结论siRNA重组慢病毒介导的MMP-2基因沉默能有效地抑制喉癌的侵袭、生长及增殖,为喉癌的基因治疗提供一定的实验依据。

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