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[摘要]目的 研究点地梅的抗炎、镇痛药理活性。 方法 采用小鼠热板法、耳廓肿胀实验及大鼠足跖肿胀实验考察点地梅的抗炎镇痛活性。 结果 与空白对照组比较,除点地梅中剂量及低剂量的镇痛作用和点地梅低剂量对耳肿胀的抑制作用无统计学意义外,各剂量的点地梅均有显著的抗炎和镇痛作用(P<0.05,P<0.01),点地梅中剂量及高剂量对小鼠耳肿胀和点地梅高剂量对大鼠足跖肿胀均有显著的抑制作用(P<0.01)。可见,点地梅有显著的抗炎和镇痛作用(P<0.05,P<0.01),并呈量效关系。 结论 点地梅具有抗炎镇痛活性。
[关键词] 点地梅;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2014)03-31-03
点地梅为报春花科点地梅属植物 [Androsace umbellata(Lour.)Merr.]的全株,系多年生草本[1]。又名喉咙草、佛顶珠、铜钱草,产于东北、华北和秦岭以南各省区,沿长江流域各省区均有分布[2-4]。点地梅全草入药,性苦、寒,具清热、解毒、消肿功效,民间用于治疗扁桃腺炎[5]、咽喉炎[6-7]、口腔炎等炎症疾病,故有喉咙草之称[8-9]。也有作治跌打损伤药的记载[10]。本研究通过实验初步考察点地梅的抗炎、镇痛药理活性,为点地梅植物的临床应用和研究提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 动物及饲养条件
昆明种小鼠,体质量18~22g,雌性;SD大鼠,
体重120~150g,雄性[均由重庆医科大学实验动物中心提供,许可证:SYXK(渝)2012-0001];重庆医科大学实验动物观察室,室内光照为自然昼夜交替,温度为15~25℃,相对湿度为45%~65%,通风良好,环境相对安静。饲料为实验鼠配合饲料(由重庆医科大学实验动物中心提供,许可证:SCXK(渝)2012-0002),将饲料放置于鼠笼饲料槽内,自由摄食及饮水。
1.2 药品、试剂及仪器
点地梅药材购于安国中药材市场;阿司匹林肠溶片(神威药业集团有限公司,H13023716);二甲苯AR(成都市科龙化工试剂厂);FA2104A电子天平(上海精天电子仪器有限公司);RB-200智能热板仪(成都泰盟软件有限公司);耳肿打耳器(上海玉研科学仪器有限公司);PV-200型足趾容积测量仪(上海欣曼科教设备有限公司)。
1.3 样品制备[11]
点地梅购于安国中药材市场,经鉴定为报春花科点地梅Androsace umbellata(Lour.)Merr.的全株。取点地梅药材,用蒸馏水煎煮二次,煎煮液浓缩至每1克浸膏相当于2g原药材,备用。
1.4 分组及给药剂量[12]
耳廓肿胀组:取60只雌性昆明小鼠随机分为5组,每组12只;足趾肿胀组:取30只雄性SD大鼠随机分为5组,每组6只;热板法组:取热板法筛选合格的60只雌性昆明小鼠随机分为5组,每组12只,三个实验均设空白对照组(生理盐水),阿司匹林组(0.2g/kg),点地梅浸膏高、中、低剂量组,其高、中、低剂量组分别为30,15,7.5g浸膏/kg。
1.5 二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[13-15]
各组小鼠连续灌胃给予相应受试物5d,末次给药1h后,于小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯50μL致炎,左耳为对照,1h后将小鼠颈椎脱臼处死,用直径6mm的打孔器在小鼠左右耳同一部位打下圆耳片,精密称量,右耳与左耳质量之差即为肿胀度,并计算小鼠耳廓肿胀抑制率。
耳肿胀抑制率(%)=(空白组平均耳肿胀度-给药组平均耳肿胀度)/空白组平均耳肿胀度×100%。
1.6 对蛋清液致足跖肿胀的影响[13-16]
各组大鼠连续灌胃给予相应受试物5d,第6天于大鼠右后足掌心向踝关节方向皮下注射10%鲜蛋清0.1mL,在注射蛋清致炎后的5、3、60、120和180min分别测量足趾容积,将致炎后的足趾容积减去致炎前足趾容积即为足跖肿胀度,并计算足趾肿胀抑制率。
足趾肿胀抑制率(%)=(空白组平均足趾肿胀度—给药组平均足趾肿胀度)/空白组平均足趾肿胀度×100%。
1.7 对热板法致痛的影响[13-15]
取小鼠逐只放于(55.0±0.5)℃热板仪上,记录小鼠舔后足反应所需时间(疼痛反应潜伏期)作为小鼠的痛阈值,挑选痛阈值在5~30s内的小鼠60只,分组及给药方法同1.4项下,连续灌胃给予相应受试物5d,于末次给药后1h,分别将小鼠置于(55.0±0.5)℃的热板上,测定痛阈值,并计算痛阈提高值和痛阈提高率。
痛阈提高值的提高百分率(%)=(给药后平均痛阈提高值-给药前平均痛阈提高值)/给药后平均痛阈提高值×100。
1.8 统计学处理方法
应用SPSS19.0统计分析,所有数据用()表示,组间比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 点地梅对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
与空白对照组比较,点地梅高剂量及中剂量对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀均有显著的抑制作用(P<0.01),其中高剂量组活性最强,其肿胀抑制率为32.87%,点地梅低剂量对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀有抑制作用(P<0.05)。见表1。
2.2 点地梅对热板法所致小鼠疼痛的影响
与空白对照组比较,点地梅高剂量对热板法所致小鼠疼痛有镇痛作用(P<0.05),其痛阈提高率为43.13%。见表2。
2.3 点地梅对蛋清所致足趾肿胀度的影响
与空白对照组比较,致炎后5min,点地梅高剂量对蛋清所致足趾肿胀度有抑制作用(P<0.05);致炎后30min及致炎后60min,点地梅高剂量对蛋清所致足趾肿胀度有显著的抑制作用(P<0.01),其足趾肿胀抑制率分别为58.35% 和70.28% ,点 3 讨论
本实验结果显示,与空白对照组比较,除点地梅中剂量及低剂量的镇痛作用和点地梅低剂量对耳肿胀的抑制作用无统计学意义外,各剂量的点地梅均有显著的抗炎和镇痛作用(P<0.05,P<0.01)。点地梅高剂量在二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及蛋清所致足趾肿胀度2项抗炎实验和热板法镇痛实验中均显示显著的药理活性。在二甲苯所致小鼠耳廓肿胀实验中,点地梅高剂量组的肿胀抑制率为32.87%;在热板法镇痛实验中,点地梅高剂量组的痛阈提高率为43.13%;在蛋清液所致足趾肿胀度实验中,致炎30min和60min后,点地梅高剂量组的足趾肿胀抑制率分别为53.85% 和70.28%。从数据结果分析来看,点地梅的抗炎镇痛作用与浓度不成正比关系,但很明显点地梅高剂量的抗炎镇痛作用要比低剂量和中剂量的抗炎镇痛作用好很多。可见,点地梅具有良好的抗炎镇痛作用,其高剂量的抗炎镇痛作用更好。
本实验研究可得:点地梅资源比较丰富,广泛分布于我国川藏地区,具有极大的药用价值和经济效益,但是对其资源的保护也迫在眉睫;国内外未有利用点地梅制作新药的报道,因而,地点梅很有开发价值;国内外对点地梅的药理学研究极少,有待加强;虽然有专家已经从点地梅属植物中分离、鉴别出部分药用成分,但很不系统,需要进一步完善。本实验为点地梅的临床应用和进一步的研究提供了科学依据。
[参考文献]
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.报春化科[M]//中国值物志:59卷.第一分册.北京:科学出版社,1989:141-201.
[2] 李彦连.曲阜孔林药用维管植物资原及利用[J].特种经济动植物,2001,4(9):24-33.
[3] 杨培志,吴嫉筒,王珍.陕西报春花科1种新记录植物—直立点地梅[J].西北植物学报,2008,28(2):403-405.
[4] 孙克,缪球雷.《本草纲目》中的谷精草的原植物[J].医古文知识,2002,19(2):32-33.
[5] 臧浩.点地梅合剂治疗急性扁桃体炎咽喉炎[J].江苏医药,1976(6):56-56.
[6] 栾宏庆.点地梅治疗咽喉炎72例[J].甘肃中医学院学报,1994,11(3):28-29.
[7] 杨文瑞.点地梅治喉痹[J].中成药,1993(12):46-46.
[8] 左振常.冯赤华.藏药“热衮巴”的考证及生药学研究[J].青海医药杂志,1985(6):53-55.
[9] 郭龙,巩江,倪士峰,等.藏药点地梅属药学研究进展[J].安徽农业科学,2010,38(13):6706,6726.
[10] 萧成纹.侗医药验方集锦(二)[J].中国民族民间医药杂志,2OO4(3):182-184.
[11] 王璟.如何煎制中药汤剂[J].首都医药,2000,7(2):55.
[12] 冯洁,周劲帆,覃富景,等.两面针根和茎抗炎镇痛不同部位活性比较研究[J].中药药理与临床,2011,27(6):60-63.
[13] 陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994,12:70.
[14] 魏伟,李希美,李元健.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2010:738,742-746,769-770.
[15] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2002:882.
[16] 周大兴,吴森林.珍珠水提取液的抗炎、抗氧化作用[J]浙江中医学院学报,2001,25(4):41-42.
(收稿日期:2013-12-12)
[关键词] 点地梅;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2014)03-31-03
点地梅为报春花科点地梅属植物 [Androsace umbellata(Lour.)Merr.]的全株,系多年生草本[1]。又名喉咙草、佛顶珠、铜钱草,产于东北、华北和秦岭以南各省区,沿长江流域各省区均有分布[2-4]。点地梅全草入药,性苦、寒,具清热、解毒、消肿功效,民间用于治疗扁桃腺炎[5]、咽喉炎[6-7]、口腔炎等炎症疾病,故有喉咙草之称[8-9]。也有作治跌打损伤药的记载[10]。本研究通过实验初步考察点地梅的抗炎、镇痛药理活性,为点地梅植物的临床应用和研究提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 动物及饲养条件
昆明种小鼠,体质量18~22g,雌性;SD大鼠,
体重120~150g,雄性[均由重庆医科大学实验动物中心提供,许可证:SYXK(渝)2012-0001];重庆医科大学实验动物观察室,室内光照为自然昼夜交替,温度为15~25℃,相对湿度为45%~65%,通风良好,环境相对安静。饲料为实验鼠配合饲料(由重庆医科大学实验动物中心提供,许可证:SCXK(渝)2012-0002),将饲料放置于鼠笼饲料槽内,自由摄食及饮水。
1.2 药品、试剂及仪器
点地梅药材购于安国中药材市场;阿司匹林肠溶片(神威药业集团有限公司,H13023716);二甲苯AR(成都市科龙化工试剂厂);FA2104A电子天平(上海精天电子仪器有限公司);RB-200智能热板仪(成都泰盟软件有限公司);耳肿打耳器(上海玉研科学仪器有限公司);PV-200型足趾容积测量仪(上海欣曼科教设备有限公司)。
1.3 样品制备[11]
点地梅购于安国中药材市场,经鉴定为报春花科点地梅Androsace umbellata(Lour.)Merr.的全株。取点地梅药材,用蒸馏水煎煮二次,煎煮液浓缩至每1克浸膏相当于2g原药材,备用。
1.4 分组及给药剂量[12]
耳廓肿胀组:取60只雌性昆明小鼠随机分为5组,每组12只;足趾肿胀组:取30只雄性SD大鼠随机分为5组,每组6只;热板法组:取热板法筛选合格的60只雌性昆明小鼠随机分为5组,每组12只,三个实验均设空白对照组(生理盐水),阿司匹林组(0.2g/kg),点地梅浸膏高、中、低剂量组,其高、中、低剂量组分别为30,15,7.5g浸膏/kg。
1.5 二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响[13-15]
各组小鼠连续灌胃给予相应受试物5d,末次给药1h后,于小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯50μL致炎,左耳为对照,1h后将小鼠颈椎脱臼处死,用直径6mm的打孔器在小鼠左右耳同一部位打下圆耳片,精密称量,右耳与左耳质量之差即为肿胀度,并计算小鼠耳廓肿胀抑制率。
耳肿胀抑制率(%)=(空白组平均耳肿胀度-给药组平均耳肿胀度)/空白组平均耳肿胀度×100%。
1.6 对蛋清液致足跖肿胀的影响[13-16]
各组大鼠连续灌胃给予相应受试物5d,第6天于大鼠右后足掌心向踝关节方向皮下注射10%鲜蛋清0.1mL,在注射蛋清致炎后的5、3、60、120和180min分别测量足趾容积,将致炎后的足趾容积减去致炎前足趾容积即为足跖肿胀度,并计算足趾肿胀抑制率。
足趾肿胀抑制率(%)=(空白组平均足趾肿胀度—给药组平均足趾肿胀度)/空白组平均足趾肿胀度×100%。
1.7 对热板法致痛的影响[13-15]
取小鼠逐只放于(55.0±0.5)℃热板仪上,记录小鼠舔后足反应所需时间(疼痛反应潜伏期)作为小鼠的痛阈值,挑选痛阈值在5~30s内的小鼠60只,分组及给药方法同1.4项下,连续灌胃给予相应受试物5d,于末次给药后1h,分别将小鼠置于(55.0±0.5)℃的热板上,测定痛阈值,并计算痛阈提高值和痛阈提高率。
痛阈提高值的提高百分率(%)=(给药后平均痛阈提高值-给药前平均痛阈提高值)/给药后平均痛阈提高值×100。
1.8 统计学处理方法
应用SPSS19.0统计分析,所有数据用()表示,组间比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 点地梅对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
与空白对照组比较,点地梅高剂量及中剂量对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀均有显著的抑制作用(P<0.01),其中高剂量组活性最强,其肿胀抑制率为32.87%,点地梅低剂量对二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀有抑制作用(P<0.05)。见表1。
2.2 点地梅对热板法所致小鼠疼痛的影响
与空白对照组比较,点地梅高剂量对热板法所致小鼠疼痛有镇痛作用(P<0.05),其痛阈提高率为43.13%。见表2。
2.3 点地梅对蛋清所致足趾肿胀度的影响
与空白对照组比较,致炎后5min,点地梅高剂量对蛋清所致足趾肿胀度有抑制作用(P<0.05);致炎后30min及致炎后60min,点地梅高剂量对蛋清所致足趾肿胀度有显著的抑制作用(P<0.01),其足趾肿胀抑制率分别为58.35% 和70.28% ,点 3 讨论
本实验结果显示,与空白对照组比较,除点地梅中剂量及低剂量的镇痛作用和点地梅低剂量对耳肿胀的抑制作用无统计学意义外,各剂量的点地梅均有显著的抗炎和镇痛作用(P<0.05,P<0.01)。点地梅高剂量在二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及蛋清所致足趾肿胀度2项抗炎实验和热板法镇痛实验中均显示显著的药理活性。在二甲苯所致小鼠耳廓肿胀实验中,点地梅高剂量组的肿胀抑制率为32.87%;在热板法镇痛实验中,点地梅高剂量组的痛阈提高率为43.13%;在蛋清液所致足趾肿胀度实验中,致炎30min和60min后,点地梅高剂量组的足趾肿胀抑制率分别为53.85% 和70.28%。从数据结果分析来看,点地梅的抗炎镇痛作用与浓度不成正比关系,但很明显点地梅高剂量的抗炎镇痛作用要比低剂量和中剂量的抗炎镇痛作用好很多。可见,点地梅具有良好的抗炎镇痛作用,其高剂量的抗炎镇痛作用更好。
本实验研究可得:点地梅资源比较丰富,广泛分布于我国川藏地区,具有极大的药用价值和经济效益,但是对其资源的保护也迫在眉睫;国内外未有利用点地梅制作新药的报道,因而,地点梅很有开发价值;国内外对点地梅的药理学研究极少,有待加强;虽然有专家已经从点地梅属植物中分离、鉴别出部分药用成分,但很不系统,需要进一步完善。本实验为点地梅的临床应用和进一步的研究提供了科学依据。
[参考文献]
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[7] 杨文瑞.点地梅治喉痹[J].中成药,1993(12):46-46.
[8] 左振常.冯赤华.藏药“热衮巴”的考证及生药学研究[J].青海医药杂志,1985(6):53-55.
[9] 郭龙,巩江,倪士峰,等.藏药点地梅属药学研究进展[J].安徽农业科学,2010,38(13):6706,6726.
[10] 萧成纹.侗医药验方集锦(二)[J].中国民族民间医药杂志,2OO4(3):182-184.
[11] 王璟.如何煎制中药汤剂[J].首都医药,2000,7(2):55.
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[13] 陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1994,12:70.
[14] 魏伟,李希美,李元健.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2010:738,742-746,769-770.
[15] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2002:882.
[16] 周大兴,吴森林.珍珠水提取液的抗炎、抗氧化作用[J]浙江中医学院学报,2001,25(4):41-42.
(收稿日期:2013-12-12)