【摘 要】
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目的探讨CYP3A4内含子10及其内SNP CYP3A4*1G对CYP3A4基因表达的调控作用.方法构建CYP3A4启动子启动转录的CYP3A4真核表达质粒,将CYP3A4内含子10(CYP3A4*1G野生型/突变型)正
【机 构】
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郑州大学基础医学院法医学系,焦作市第二人民医院病理科,郑州大学基础医学院药理学系
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目的探讨CYP3A4内含子10及其内SNP CYP3A4*1G对CYP3A4基因表达的调控作用.方法构建CYP3A4启动子启动转录的CYP3A4真核表达质粒,将CYP3A4内含子10(CYP3A4*1G野生型/突变型)正向或反向插入该质粒的启动子上游,从而构建出不同基因型、不同方向的CYP3A4内含子10调控的CYP3A4真核表达质粒.将构建好的各质粒分别转染入Hep G2细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测CYP3A4 m RNA表达水平.结果构建的重组质粒经酶切验证与测序鉴定,插入片段的序列和方向与预期完全一致.无论CYP3A4*1G野生型还是突变型,反向组CYP3A4 m RNA表达水平均高于正向组(P<0.01);而CYP3A4内含子10无论是正向还是反向,CYP3A4*1G野生型组CYP3A4 m RNA表达水平均高于突变型组(P<0.01).此外,正向突变组CYP3A4 m RNA表达水平低于阳性对照组,不但没有增强CYP3A4启动子的转录作用反而有所减弱.结论CYP3A4内含子10有类似于增强子的功能,能够影响CYP3A4启动子对CYP3A4基因的转录,且具有方向性和CYP3A4*1G等位基因依赖性.
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