论文部分内容阅读
目的
构建乳脂球表皮生长因子-8(MFG-E8)短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体，稳定转染HCC1973细胞株，检测其在乳腺癌细胞HCC1973中的干扰效率及影响。
方法通过构建PLKO.1-MFG-E8重组慢病毒载体，并将包装好的重组慢病毒感染乳腺癌细胞HCC1973，实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测MFG-E8基因的表达，蛋白质印迹法(Western blot)法检测MFG-E8蛋白的表达；同时采用噻唑蓝(MTT)检测细胞的增殖能力、流式细胞技术(FCM)检测细胞的周期及凋亡变化、Transwell检测细胞的侵袭迁移能力。应用SPSS 17.0统计软件进行分析。
结果成功构建的PLKO.1-MFG-E8 shRNA重组慢病毒载体可明显降低MFG-E8基因和蛋白的表达；重组载体经包装产生的慢病毒滴度为3×108 PFU/ml；经shRNA干扰后的乳腺癌细胞，细胞增殖能力显著减弱(t＝4.426，P<0.05)，G0/G1期细胞明显增加，S期细胞明显减少(t＝2.264，P<0.05)，细胞侵袭、迁移能力明显降低(t＝4.802，P<0.05)。
结论通过shRNA干扰MFG-E8基因和蛋白的表达，能有效抑制乳腺癌细胞向恶性生物学行为的改变，表明在乳腺癌发生的过程中，MFG-E8参与介导乳腺癌的侵袭转移及凋亡。