【摘 要】
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目的 目前组织工程骨(tissue engineered bone,TEB)缺乏有效可行的储存、运输方法.评估TEB经过冻干处理后其成骨活性变化及其异位成骨能力,探索新的TEB储存和运输策略.方法
【机 构】
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第三军医大学组织工程研究与开发中心第三军医大学附属西南医院骨科全军矫形外科中心,重庆,400038
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目的 目前组织工程骨(tissue engineered bone,TEB)缺乏有效可行的储存、运输方法.评估TEB经过冻干处理后其成骨活性变化及其异位成骨能力,探索新的TEB储存和运输策略.方法 取志愿者捐献的骨髓和骨组织分别培养hBMSCs和制备脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM),取第3代hBMSCs与DBM复合构建TEB,分别于体外孵育3、5、7、9、12、15 d经过低温干燥后得到冻干组织工程骨(freeze-dried tissue engineered bone,FTEB),并将体外培养不同时间点的TEB和FTEB行扫描电镜观察.Western blot法检测TEB和FTEB内成骨相关蛋白BMP-2、TGF-β1、IGF-1的变化.将FTEB、TEB和DBM分别移植于30只6周龄BALB/C裸鼠皮下进行异位成骨实验(n=10),并行X线片评分、CT值检测以及HE染色观察.结果 扫描电镜观察示,TEB中种子细胞保持正常形态,随着培养时间的延长分泌细胞外基质逐渐增加;FTEB内的种子细胞脱水皱缩而亡,细胞外基质位于疏松的DBM支架材料中.Westernblot检测示,TEB和FTEB内BMP-2、TGF-β1和IGF-1表达均为阳性,除体外培养15 d TEB和FTEB的TGF-β1蛋白积分吸光度(IA)比值比较差异有统计学意义(P0.05).移植术后4周各种移植物未见明显钙化;术后8、12周,TEB和FTEB移植裸鼠皮下可以实现较好的异位成骨.通过X线片评分、CT值比较移植物钙化程度,TEB和FTEB差异无统计学意义(P>0.05),而DBM未见明显钙化.HE染色示TEB和FTEB出现钙化,DBM降解吸收.结论 FTEB与TEB具有相似的成骨活性,为TEB的储存和运输提供了一种新的策略和方法.
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