辣椒黄绿苗不育系叶片光合色素变化及酶活性研究

来源 :中国瓜菜 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a282952061
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  摘要:研究了辣椒(Capsicum oaznum L.)黄绿苗胞质雄性不育系(YBM-A6)、保持系(YBM-B6)及绿苗(96—140)的叶绿素变化及叶片酶活性。从幼苗期到成株期三者的叶绿素含量呈逐步增加的变化趋势,绿苗叶片叶绿素、类胡萝卜含量都远高于黄绿苗,但黄绿苗叶片叶绿素a/b、类胡萝卜素/叶绿素(a b)(除结果期外)的比值都远大于绿苗。黄绿苗叶片中游离脯氨酸含量均高于绿苗,但其含量变化趋势相同;黄绿苗叶片中过氧化物酶、过氧化氢酶活性变化趋势与绿苗相同;YBM-A6叶片过氧化氢酶活性均低于其保持系YBM-B6,过氧化物酶活性则高于其保持系,超氧化物歧化酶活性在开花结果盛期明显高于保持系YBM-B6和96-140。说明叶绿素和类胡萝卜素含量和变化与辣椒黄绿苗的叶色变化有关,酶活性变化可能与黄绿苗胞质雄性不育系YBM-A6的不育有关。
  关键词:辣椒;黄绿苗;胞质雄性不育系:叶绿素:酶
  
  形态标记中植物叶色突变体早在20世纪30年代就已发现。植物叶片呈色相当复杂,它与叶片细胞内色素的种类、含量以及在叶片中的分布有关。大田作物中在水稻、大豆、大麦、小麦、棉花17等多种植物上发现。目前,叶色突变体已广泛应用于基础研究和生产实践中。相对于大田作物,蔬菜叶色突变体的研究还较为落后,仅在甜瓜、西瓜㈣、黄瓜、番茄、辣椒、花椰菜、胡萝卜、小白菜等蔬菜上有相关报道。
  叶色突变体在育种上具有重要的应用价值,以其可见、简单直观的外部特征,在作物种质资源鉴定及育种材料的选择上发挥了重要作用。在育种工作中,叶色变异可作为标记性状,简化良种繁育和杂交种生产;某些叶色突变体具有特殊的优良性状,为作物遗传育种提供了优异种质资源,对辣椒黄绿苗与H97643自交分离世代中胞质雄性不育株98—1A、98—3A不育源进行杂交、自交、回交等工作,已基本实现了辣椒黄绿叶标记性状与雄性不育系的有机结合,该突变体具有较强的耐弱光和抗高温等优良特性,为辣椒在雄性不育、创造优异种质资源,选育优良品种、光合系统结构与功能及其调控机制、杂种纯度快速鉴定等方面的研究提供了有效手段。
  本研究通过对辣椒黄绿苗胞质雄性不育系(cMS)及其保持系、牛角辣椒(绿苗)的叶绿体色素含量,叶片游离脯氨酸含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxi-dase,POD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性变化进行比较分析,为探明色素与叶色变化及叶片酶活性变化对胞质雄性不育利用的影响,探讨辣椒黄绿苗胞质雄性不育机理及品种选育与利用提供理论依据。
  
  1 材料与方法
  
  1.1供试材料
  供试材料为江苏省镇江市蔬菜研究所提供。96-140:野生牛角辣椒,叶色为绿色。YBM-A6:以不育源H97643自交分离世代中胞质雄性不育株98-1A、98-3A为不育源,经与辣椒黄绿苗YBM-B6杂交分离,多代回交转育而成,属于无花粉雄性不育类型,不育性稳定,不育株率100%。YBM-B6:为从牛角辣椒96-140中发现的辣椒黄绿苗突变体。发芽期子叶及真叶全部为嫩黄色;幼苗期(苗期)真叶黄色,老叶为黄绿色:开花结果期下部叶片绿色,中部叶片黄绿色,上部新生叶片黄绿色(偏黄),除叶色黄绿外,其他性状与96-140相同(见彩版插页第37页)。YBM-B6为不育系YBM-A6的保持系。
  
  1.2试验方法
  试验于2009年12月至2010年6月在江苏省镇江市蔬菜研究所大棚内进行。采用电热温床穴盘直播育苗,当幼苗6叶1心时定植于大棚,常规栽培管理。在A.幼苗期(3片叶)、B.苗期(7片叶)、C.开花结果初期(26片叶)、D.开花结果盛期测定辣椒黄绿苗不育系YBM-A6和保持系YBM-B6及牛角辣椒96-140叶片叶绿体色素含量。幼苗期、苗期、开花结果初期、开花结果盛期选取顶部刚刚完全展开的叶片进行测定,试验设3次重复,测定结果取3次重复平均值。96-140辣椒选取叶片部位同辣椒黄绿苗,方法同上。
  叶绿素(叶绿素a,Chlorophyll a:叶绿素b,Chlorophyll b)、类胡萝卜素(Carotenoid)含量测定参照沈伟其的方法;脯氨酸含量采用水浴浸提法测定:SOD活性采用氮蓝四唑法测定:POD活性采用愈创木酚连续测定法测定;CAT活性参照邹琦的方法测定。测定值以mean SD表示,采用Excel和GraphPadPrism 5.0软件进行数据分析,组间比较采用多样本均数Two-way ANOVA检验,P<0.05表示差异有统计学意义,P<0.01表示有显著性差异,P<0.001表示有极显著性差异。
  
  
  2 结果与分析
  
  2.1不同材料不同时期叶片叶绿素及类胡萝卜素含量变化
  试验结果显示,YBM-A6、YBM-B6叶片中叶绿素a、叶绿素b、类胡萝h素、叶绿素(a b)含量与96-140比较,从幼苗期一开花结果盛期含量差异显著或极显著(P<0.01,P<0.001);YBM-A6叶片中叶绿素a、叶绿素b、类胡萝h素、叶绿素(a b)含量与YBM-B6比较,从幼苗期一开花结果盛期总体上差异不明显。YBM-A6、YBM-B6、96-140叶片叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、叶绿素(a b)含量变化趋势相同,均逐步升高。
  YBM-A6与96-140叶片叶绿素a/b比较,在幼苗期无显著差异,在苗期一开花结果盛期差异显著或极显著:YBM-A6与YBM-B6叶片叶绿素a/b比较,从幼苗期一开花结果盛期无显著差异。YBM-B6叶片叶绿素a/b与96-140比较,在苗期差异极显著,在幼苗期、开花结果初期、开花结果盛期无显著差异。YBM-A6和YBM-B6叶绿素a/b在幼苗期一开花结果盛期变化范围在3.1-3.9:96-140叶绿素a/b在幼苗期一开花结果盛期明显低于YBM-A6和YBM-B6,在幼苗期一开花结果盛期变化范围在2.44-2.86,说明YBM-A6、YBM-B6中叶绿素b相对减少较多。
  YBM-A6、YBM-B6与96-140叶片类胡萝卜素/叶绿素(a b)比较,在幼苗期、苗期差异极显著,在开花结果初期、开花结果盛期无差异:YBM-A6与YBM-B6叶片类胡萝卜素/叶绿素(a b)比较,从幼苗期一开花结果盛期无差异。YBM-A6、YBM-B6叶片类胡萝h素/叶绿素(a b)在幼苗期一开花结果盛期变化趋势逐步降低,并趋于平缓:96-140叶片类胡萝卜素/叶绿素(a b)在幼苗期、苗期明显低于前二者,说明YBM-A6和YBM-B6叶片中类胡萝卜素含量相对减少较多,在开花结果初期、开花结果盛期叶片中类胡萝卜素含量相对减少较小。见图1。
  2.2不同材料不同时期叶片游离脯氨酸含量及POD、SOD、CAT活性变化
  YBM-A6与YBM-B6叶片游离脯氨酸含量在幼苗期一开花结果盛期无差异:YBM-A6与96-140叶片游离脯氨酸含量在幼苗期一开花结果初期差异极显著,在开花结果盛期差异显著:YBM-B6与96-140叶片游离脯氨酸含量相比,幼苗期一开花结果盛期差异极显著:且YBM-A6、YBM-B6叶片游离脯氨酸含量在不同时期均高于96-140。
  YBM-A6与YBM-B6、96-140叶片POD活性比较,从幼苗期-开花结果盛期差异极显著,YBM-B6与96-140叶片POD活性比较,从幼苗期-苗期差异极显著,从开花结果初期-开花结果盛期差异不显著。YBM-A6、YBM-B6、96-140叶片POD活性从幼苗期-开花结果盛期变化趋势基本相同,均呈现高-低-高的变化趋势。
  YBM-A6与YBM-B6叶片SOD活性幼苗期-苗期无差异,开花结果初期一开花结果盛期差异显著或极显著:YBM-A6与96-140叶片SOD活性在幼苗期一开花结果盛期差异极显著。YBM-B6与96-140叶片SOD活性比较,幼苗期一苗期差异显著,开花结果初期一开花结果盛期无差异。YBM-B6、96-140叶片SOD活性从幼苗期一开花结果盛期变化趋势基本相同,均呈现由高-低迅速降低的变化趋势,而YBM-A6叶片SOD活性在幼苗期一开花结果初期呈现由高-低迅速降低,开花结果盛期则呈现明显增高的变化趋势。
  YBM-A6与YBM-B6、96-140叶片CAT活性在幼苗期一开花结果盛期差异极显著:YBM-B6与96-140叶片CAT活性在幼苗期一开花结果盛期无差异。YBM-A6、YBM-B6、96-140叶片CAT活性在幼苗期一开花结果盛期均呈现下降趋势,在苗期一开花结果盛期变化幅度不显著(图2)。
  
  3 讨论
  
  叶色是各种色素共同作用所表现出来的结果,由于普通叶片中叶绿素比类胡萝卜素多,所以叶片总是呈现绿色。辣椒黄绿苗突变体YBM-A6、YBM-B6在幼苗期、苗期、开花结果初期、开花结果盛期叶绿素a/b的比值和幼苗期一苗期类胡萝卜素/叶绿素(a b)的比值都远大于96-140(原绿苗)。本试验结果与谈建中等研究有关桑树叶色突变体叶绿素a和叶绿素b的含量明显减少是导致叶色黄化的主要原因有一致之处,但辣椒黄绿苗突变体YBM-A6与YBM-B6的幼苗期一苗期类胡萝卜素/叶绿素(a b)的比值都远大于96-140,在开花结果初期、开花结果盛期无差异,但总体上表现类胡萝卜素/叶绿素(a b)比值逐步下降,推测叶片中叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素含量以及由其变化所引起的各色素相对含量的变化是导致叶片变色的原因。
  96-140叶片叶绿素、类胡萝h素含量都远高于YBM-A6、YBM-B6,但YBM-A6、YBM-B6叶片叶绿素a/b、类胡萝卜素/叶绿素(a b)(除结果期外)比值都远大于96-140。叶绿素a/b比值大,说明叶绿素b相对减少较多,YBM-A6、YBM-B6叶片类胡萝卜素/叶绿素(a b)比值较高,表明其在相同光能条件下比野生型辣椒有较强的活性氧清除能力,从而能更有效地保护其光合机构免受破坏。推断辣椒黄苗突变体虽然在幼苗期、苗期(叶色为黄绿色)只有较弱的捕光能力,但提高了其光系统Ⅱ的光化学效率,但到达开花结果初期后,随着中下部叶片的转绿,其捕光能力进一步增强,新生叶片(上部叶片)仍然为黄色,在强光下比96-140有较强的热耗散能力和更有效的活性氧清除系统,说明了该辣椒黄绿苗突变体具有较强的耐弱光和抗高温等优良特性。不同色素种类及其含量的时空组合最终决定叶色,黄化组织较绿色组织含有较多的光敏素,红、橙、黄色多分布在阳光强烈处,可反射含热量高的红、橙、黄光而保护叶片不被灼伤,这也进一步说明了该辣椒黄绿苗突变体具有较强的耐弱光和抗高温等优良特性。
  辣椒黄绿苗不育系、保持系叶片中的游离脯氨酸含量显著高于绿苗,说明辣椒黄绿苗游离脯氨酸含量高可能与黄绿苗叶色变异相关,而与辣椒雄性不育无关。开花结果阶段辣椒黄绿苗胞质雄性不育系YBM-A6叶片中SOD活性且呈增强趋势,叶片中CAT活性显著低于保持系YBM-B6与96-140花蕾中CAT活性,POD活性显著高于其保持系YBM-B6与96-140叶片中POD活性。推断叶片中酶活性的异常变化与辣椒胞质雄性不育有一定关系。
  辣椒黄绿苗突变体作为一种非常明显的性状突变,在蔬菜作物优质育种中有很大的利用价值,可利用黄化突变系进行高光效育种,在受到高温、高光强等不利环境胁迫时,仍能有效进行光合作用:利用辣椒黄绿苗突变体胞质雄性不育系特性,在缺少恢复性的情况下,利用其叶绿素a/b、类胡萝卜素/叶绿素(a b)相对含量较高,也可直接进行高品质食叶辣椒新品种的选育开发等。
  
  4 结论
  
  笔者通过研究辣椒黄绿苗胞质雄性不育系YBM-A6,保持系YBM-B6及绿苗96-140从幼苗期到成株期的叶绿素变化及叶片酶活性发现,叶绿素和类胡萝卜素含量和变化与辣椒黄绿苗的叶色变化有关,与正常育性辣椒表现相比,辣椒黄绿苗胞质雄性不育系酶活性的变化(或代谢紊乱)可能与黄绿苗胞质雄性不育系YBM-A6的不育有关。
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