猪星状病毒4型SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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【摘要】

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为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体

【作者】

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陈少杰刘立辉吴志勇肖娜袁广富王晶邢亚茹刘如月

【机构】

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河北农业大学动物医学院,定州市农业农村局,邯郸市畜牧技术推广站

【出处】

：

畜牧兽医学报

【发表日期】

：

2020年2期

【关键词】

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猪星状病毒荧光定量 SYBR GreenⅠ Porcine astrovirusRT-PCRSYBR Green Ⅰ

【基金项目】

：

河北省重点研发计划项目(19226622D),河北省农业产业技术体系生猪创新团队(HBCT2018110207)

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为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上;将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证。结果显示,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1,其灵敏度是普通PCR的100倍;与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、P

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