【摘 要】
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目的优化脐带血单个核细胞的分离方法，培养、纯化及鉴定脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)，并观察其生物学特性，探讨单份和混合UCB-MSCs的区别。方法采用四联袋方法和试管方法分离脐带血单个核细胞，比较两种方法分离后单个核细胞的回收率、细胞数及红细胞混入量。鉴定UCB-MSCs向神经样细胞横向分化的能力。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析单份组和混合组培养液上清中白细胞介素(IL)-2和γ-干
【机 构】
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郑州大学第一附属医院神经外科 450052,郑州大学附属郑州中心医院放射科 450007,郑州大学第一附属医院神经外科 450052,郑州大学第一附属医院神经外科 450052
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目的优化脐带血单个核细胞的分离方法，培养、纯化及鉴定脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)，并观察其生物学特性，探讨单份和混合UCB-MSCs的区别。
方法采用四联袋方法和试管方法分离脐带血单个核细胞，比较两种方法分离后单个核细胞的回收率、细胞数及红细胞混入量。鉴定UCB-MSCs向神经样细胞横向分化的能力。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析单份组和混合组培养液上清中白细胞介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)含量。符合正态分布并方差齐的，根据数据类型应用参数检验中的单因素方差分析或t检验，不符合正态分布的应用非参数检验中秩和检验。
结果试管法和四联袋法分离的单个核细胞回收率分别为(60.23±6.34)%、(71.92±11.30)%(P<0.05)。试管法和四联袋法分离后单个核细胞(MNC)数量分别为(6.12±1.21)×107、(9.29±3.11)×107个(P<0.05)。混合组的培养液上清中IL-2和IFN-γ含量高于单份组。单份组和混合组的IL-2水平分别为(0.52±0.13)、(1.50±0.23) pg/ml(P<0.05)；单份组和混合组IFN-γ水平分别为(43.16±4.75)、(56.07±6.67) pg/ml(P<0.05)。巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)染色均为阳性表达。
结论采用四联袋方法分离的单个核细胞回收率和细胞数均高于试管方法，四联袋法分离单个核细胞是一种高效、高质量和安全的分离方法，UCB-MSCs可以向神经样细胞分化，混合组UCB-MSCs增殖活跃，分泌更多IL-2和IFN-γ细胞因子。
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