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【中图分类号】R737.1【文献标识码】A【文章编号】1550-1868（2015）04
【摘要】目的：检测埃兹蛋白（Ezrin）、CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓、肾癌（不伴静脉瘤栓）及癌旁正常肾组织中的表达及与瘤栓形成的关系及意义。方法：运用免疫组化SP法检测25例伴瘤栓形成组织、27例肾癌组织及10例癌旁肾组织中Ezrin、CD44v6的表达情况。结果：Ezrin在25例肾癌伴静脉瘤栓中表达率为88%（22/25），肾癌组表达率为81.5%（22/27），癌旁正常肾组织表达率为50%（5/10），Ezrin在肾癌伴静脉瘤栓中表达率显著高于肾癌组、癌旁肾组织组（p<0.05）；CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓组表达率为96%（24/25），肾癌组表达率为77.8%（21/26），癌旁肾组织表达率为0（0/10），CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓形成组表达率高于肾癌组、癌旁肾组织组（p<0.05）；两者表达呈正相关（γ=0.326，p<0.05）；Ezrin、CD44v6与淋巴结转移有关（p<0.05），与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分期无关（p>0.05）。结论：1、Ezrin、CD44v6在肾癌静脉瘤栓形成中起到关键作用2、联合监测ezrin及CD44v6有助于判断晚期肾癌的预后。
【关键词】埃兹蛋白，CD44v6，肾细胞癌伴静脉瘤栓形成，免疫组织化学
肾细胞癌是泌尿系统中常见的恶性肿瘤[1]。约30%患者发现时已出现转移。肾癌常常侵犯静脉系统，向肾静脉、下腔静脉甚至侵犯至右心房形成瘤栓。根治性肾切除联合静脉取栓术为首选的治疗方案，能明显提高患者生存率（23%-63%）及生活质量。但容易出现淋巴及远处转移或瘤栓复发。近年来，膜细胞骨架蛋白埃兹蛋白（Ezrin）和细胞粘附分子CD44v6在多种肿瘤的转移过程中的作用被广泛研究，在淋巴转移肿瘤中常联合监测出Ezrin、CD44v6的表达，两者在肾癌伴静脉瘤栓形成中表达鲜见报道。为研究探讨Ezrin、CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓中的表达情况，本研究采用免疫组化SP法监测肾癌伴静脉瘤栓、肾癌、癌旁肾组织中的表达情况如下。
1资料和方法
1.1一般资料：试验标本选自武警总医院2008-2014年行根治性肾切除联合静脉取栓术病例25例，男19例、女6例。所用患者术前未行栓塞治疗、化疗及放疗。术后病理回报明确诊断：18例透明细胞癌，4例为乳头状肾细胞癌，肾肉瘤3例。年龄范围在36-72岁，平均年龄53.24岁组织学分型采用2014年泌尿外科疾病诊治指南，肾癌伴静脉瘤栓病例采用Mayo Clinic五级分类法。同时随机抽取同期入院手术病例27例、癌旁肾组织10例作为对照。Ezrin购自Santa，CD44v6及相关免疫组化试剂均购自福州迈新生物科技开发有限公司。仪器、设备由武警总医院中心实验室提供。
1、2监测方法
石蜡切片集中连续切片，4μm厚度，操作方法严格按照试剂说明书进行。采用PBS代替一抗作为阴性对照。采用已知切片做阳性对照。
1、3结果判断标准
随机从每张切片中选取6个视野，共计数150个肿瘤细胞，Ezrin表达在细胞质，细胞浆或细胞膜内阳性表达时，呈淡黄色或褐棕色粒状；CD44v6定位于细胞膜内侧，分布呈线性，阳性表达为胞浆内呈棕黄色或褐色颗粒。参考Mathew，Gonzalez评价标准[24]：综合考虑染色强度和阳性细胞数。由2名富经验病理医生共同阅片，同一切片采用综合评分。
1.4统计处理
数据采用SPSS13.0分析，显著性检验采用卡方检验，等级相关性采用Spearman数值进行分析。
2 结果
2.1 Ezrin在肾癌伴静脉瘤栓中的表达
Ezrin阳性表达率静脉瘤栓组为88%（22/25），肾癌组为81.5%（22/27），癌旁正常肾组织为50%（5/10）。Ezrin腔静脉瘤栓组表达率（92%）显著高于肾癌组、癌旁肾组织组（p<0，05），见表1
3 讨论
Ezrin蛋白是ERM（Ezrin-radixin-moesin）家族中的一员。Ezrin在肿瘤分化、转移中起到关键作用，尤其是肿瘤与基质间的粘附趋化、肿瘤细胞的运动上起到关键作用。多项研究表明ezrin在肾癌、食管癌中表达呈现淋巴转移组显著高于无转移组。周琳等报道Ezrin参与信号转导通路参与肿瘤的转移，如激活Src癌基因。RNA干扰技术证明，肝癌中Ezrin表达抑制会导致肿瘤的侵袭、增殖能力显著下降。细胞粘附分子CD44v6为CD44变异体，广泛研究表明CD44v6同时发挥细胞透明质酸受体及脂筏的作用，造成细胞游动性和形态的改变，助于肿瘤细胞的潜在转移趋势。韩宝龙发现CD44v6是反映肾癌恶性程度及预后的有效指标。本实验中Ezrin阳性表达见于近乎所用静脉瘤栓病例。静脉瘤栓组表达88%显著高于肾癌组、癌旁肾组织组，差异具有统计学意义，Ezrin与淋巴转移表达差异明显，表明Ezrin在静脉瘤栓形成、淋巴转移中起到一定作用，Ezrin表达随着病变进展而增强，Ezrin的过度表达参与肿瘤发展、瘤栓形成。CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓组表达率（96%）明显高于肾癌组（76%），均高于癌旁肾组织组，在淋巴转移组中表达差异明显，提示CD44v6在瘤栓形成肿瘤转移中起到一定作用。Ezrin在肾癌中过度表达提示Ezrin蛋白增强了肿瘤细胞浸润侵袭基底膜的能力，持续的过度表达使得肿瘤细胞继续浸润淋巴管和血管发生远处转移。研究发现Ezrin的过度表达会上调CD44v6的表达及改变细胞骨架的结构，使得肿瘤细胞更容易脱离细胞基质，结合实验结果Ezrin、CD44v6表达呈正相关（p<0.05）。Ezrin和CD44v6的联合表达肿瘤细胞容易脱离动静脉瘘和淋巴管，形成静脉瘤栓或远处转移。因此我们认为在临床上联合两者表达，具有一定的判断预后的作用。 参考文献
[1]赫捷，赵平，陈万青. 中国肿瘤登记年报[M]. 北京： 军事医学科学出版社，2011： 76.
[2]Hatcher PA，AndersonEE，PaulsonDF，et al. Surgical management andprognosisof renal cell carcinomainvadingthevenacava[J. JUrol，1991，145（ 1） ： 20-24.
[3]Moinzadeh A， Libertino J A. Prognostic significance of tumor thrombus level in patients with renal cell carcinoma and venous tumor thrombus extension. Is all T3b the same [J]. The Journal of urology， 2004， 171（2）： 598-601.
[4]Kunishi M， Kayada Y， Yoshiga K. Down-regulated expression of CD44 variant 6 in oral squamous cell carcinomas and its relationship to regional lymph node metastasis[J]. International journal of oral and maxillofacial surgery， 1997， 26（4）： 280-283.
[5]Tawfik O W， Kramer B， Shideler B， et al. Prognostic significance of CD44， platelet-derived growth factor receptor alpha， and cyclooxygenase 2 expression in renal cell carcinoma[J]. Archives of pathology & laboratory medicine， 2007， 131（2）： 261-267.
[6]Martin T A， Harrison G， Mansel R E， et al. The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis[J]. Critical reviews in oncology/hematology， 2003， 46（2）： 165-186.
[7]Yonemura S， Hirao M， Doi Y， et al. Ezrin/radixin/moesin （ERM） proteins bind to a positively charged amino acid cluster in the juxta-membrane cytoplasmic domain of CD44， CD43， and ICAM-2[J]. The Journal of cell biology， 1998， 140（4）： 885-895.
[8]杨旭凯， 郑少斌， 周海宽， 等. 膜细胞骨架蛋白-ezrin 在肾细胞癌中的表达及意义[J]. 肿瘤防治研究， 2009， 36（6）： 500-503.
【摘要】目的：检测埃兹蛋白（Ezrin）、CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓、肾癌（不伴静脉瘤栓）及癌旁正常肾组织中的表达及与瘤栓形成的关系及意义。方法：运用免疫组化SP法检测25例伴瘤栓形成组织、27例肾癌组织及10例癌旁肾组织中Ezrin、CD44v6的表达情况。结果：Ezrin在25例肾癌伴静脉瘤栓中表达率为88%（22/25），肾癌组表达率为81.5%（22/27），癌旁正常肾组织表达率为50%（5/10），Ezrin在肾癌伴静脉瘤栓中表达率显著高于肾癌组、癌旁肾组织组（p<0.05）；CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓组表达率为96%（24/25），肾癌组表达率为77.8%（21/26），癌旁肾组织表达率为0（0/10），CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓形成组表达率高于肾癌组、癌旁肾组织组（p<0.05）；两者表达呈正相关（γ=0.326，p<0.05）；Ezrin、CD44v6与淋巴结转移有关（p<0.05），与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分期无关（p>0.05）。结论：1、Ezrin、CD44v6在肾癌静脉瘤栓形成中起到关键作用2、联合监测ezrin及CD44v6有助于判断晚期肾癌的预后。
【关键词】埃兹蛋白，CD44v6，肾细胞癌伴静脉瘤栓形成，免疫组织化学
肾细胞癌是泌尿系统中常见的恶性肿瘤[1]。约30%患者发现时已出现转移。肾癌常常侵犯静脉系统，向肾静脉、下腔静脉甚至侵犯至右心房形成瘤栓。根治性肾切除联合静脉取栓术为首选的治疗方案，能明显提高患者生存率（23%-63%）及生活质量。但容易出现淋巴及远处转移或瘤栓复发。近年来，膜细胞骨架蛋白埃兹蛋白（Ezrin）和细胞粘附分子CD44v6在多种肿瘤的转移过程中的作用被广泛研究，在淋巴转移肿瘤中常联合监测出Ezrin、CD44v6的表达，两者在肾癌伴静脉瘤栓形成中表达鲜见报道。为研究探讨Ezrin、CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓中的表达情况，本研究采用免疫组化SP法监测肾癌伴静脉瘤栓、肾癌、癌旁肾组织中的表达情况如下。
1资料和方法
1.1一般资料：试验标本选自武警总医院2008-2014年行根治性肾切除联合静脉取栓术病例25例，男19例、女6例。所用患者术前未行栓塞治疗、化疗及放疗。术后病理回报明确诊断：18例透明细胞癌，4例为乳头状肾细胞癌，肾肉瘤3例。年龄范围在36-72岁，平均年龄53.24岁组织学分型采用2014年泌尿外科疾病诊治指南，肾癌伴静脉瘤栓病例采用Mayo Clinic五级分类法。同时随机抽取同期入院手术病例27例、癌旁肾组织10例作为对照。Ezrin购自Santa，CD44v6及相关免疫组化试剂均购自福州迈新生物科技开发有限公司。仪器、设备由武警总医院中心实验室提供。
1、2监测方法
石蜡切片集中连续切片，4μm厚度，操作方法严格按照试剂说明书进行。采用PBS代替一抗作为阴性对照。采用已知切片做阳性对照。
1、3结果判断标准
随机从每张切片中选取6个视野，共计数150个肿瘤细胞，Ezrin表达在细胞质，细胞浆或细胞膜内阳性表达时，呈淡黄色或褐棕色粒状；CD44v6定位于细胞膜内侧，分布呈线性，阳性表达为胞浆内呈棕黄色或褐色颗粒。参考Mathew，Gonzalez评价标准[24]：综合考虑染色强度和阳性细胞数。由2名富经验病理医生共同阅片，同一切片采用综合评分。
1.4统计处理
数据采用SPSS13.0分析，显著性检验采用卡方检验，等级相关性采用Spearman数值进行分析。
2 结果
2.1 Ezrin在肾癌伴静脉瘤栓中的表达
Ezrin阳性表达率静脉瘤栓组为88%（22/25），肾癌组为81.5%（22/27），癌旁正常肾组织为50%（5/10）。Ezrin腔静脉瘤栓组表达率（92%）显著高于肾癌组、癌旁肾组织组（p<0，05），见表1
3 讨论
Ezrin蛋白是ERM（Ezrin-radixin-moesin）家族中的一员。Ezrin在肿瘤分化、转移中起到关键作用，尤其是肿瘤与基质间的粘附趋化、肿瘤细胞的运动上起到关键作用。多项研究表明ezrin在肾癌、食管癌中表达呈现淋巴转移组显著高于无转移组。周琳等报道Ezrin参与信号转导通路参与肿瘤的转移，如激活Src癌基因。RNA干扰技术证明，肝癌中Ezrin表达抑制会导致肿瘤的侵袭、增殖能力显著下降。细胞粘附分子CD44v6为CD44变异体，广泛研究表明CD44v6同时发挥细胞透明质酸受体及脂筏的作用，造成细胞游动性和形态的改变，助于肿瘤细胞的潜在转移趋势。韩宝龙发现CD44v6是反映肾癌恶性程度及预后的有效指标。本实验中Ezrin阳性表达见于近乎所用静脉瘤栓病例。静脉瘤栓组表达88%显著高于肾癌组、癌旁肾组织组，差异具有统计学意义，Ezrin与淋巴转移表达差异明显，表明Ezrin在静脉瘤栓形成、淋巴转移中起到一定作用，Ezrin表达随着病变进展而增强，Ezrin的过度表达参与肿瘤发展、瘤栓形成。CD44v6在肾癌伴静脉瘤栓组表达率（96%）明显高于肾癌组（76%），均高于癌旁肾组织组，在淋巴转移组中表达差异明显，提示CD44v6在瘤栓形成肿瘤转移中起到一定作用。Ezrin在肾癌中过度表达提示Ezrin蛋白增强了肿瘤细胞浸润侵袭基底膜的能力，持续的过度表达使得肿瘤细胞继续浸润淋巴管和血管发生远处转移。研究发现Ezrin的过度表达会上调CD44v6的表达及改变细胞骨架的结构，使得肿瘤细胞更容易脱离细胞基质，结合实验结果Ezrin、CD44v6表达呈正相关（p<0.05）。Ezrin和CD44v6的联合表达肿瘤细胞容易脱离动静脉瘘和淋巴管，形成静脉瘤栓或远处转移。因此我们认为在临床上联合两者表达，具有一定的判断预后的作用。 参考文献
[1]赫捷，赵平，陈万青. 中国肿瘤登记年报[M]. 北京： 军事医学科学出版社，2011： 76.
[2]Hatcher PA，AndersonEE，PaulsonDF，et al. Surgical management andprognosisof renal cell carcinomainvadingthevenacava[J. JUrol，1991，145（ 1） ： 20-24.
[3]Moinzadeh A， Libertino J A. Prognostic significance of tumor thrombus level in patients with renal cell carcinoma and venous tumor thrombus extension. Is all T3b the same [J]. The Journal of urology， 2004， 171（2）： 598-601.
[4]Kunishi M， Kayada Y， Yoshiga K. Down-regulated expression of CD44 variant 6 in oral squamous cell carcinomas and its relationship to regional lymph node metastasis[J]. International journal of oral and maxillofacial surgery， 1997， 26（4）： 280-283.
[5]Tawfik O W， Kramer B， Shideler B， et al. Prognostic significance of CD44， platelet-derived growth factor receptor alpha， and cyclooxygenase 2 expression in renal cell carcinoma[J]. Archives of pathology & laboratory medicine， 2007， 131（2）： 261-267.
[6]Martin T A， Harrison G， Mansel R E， et al. The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis[J]. Critical reviews in oncology/hematology， 2003， 46（2）： 165-186.
[7]Yonemura S， Hirao M， Doi Y， et al. Ezrin/radixin/moesin （ERM） proteins bind to a positively charged amino acid cluster in the juxta-membrane cytoplasmic domain of CD44， CD43， and ICAM-2[J]. The Journal of cell biology， 1998， 140（4）： 885-895.
[8]杨旭凯， 郑少斌， 周海宽， 等. 膜细胞骨架蛋白-ezrin 在肾细胞癌中的表达及意义[J]. 肿瘤防治研究， 2009， 36（6）： 500-503.