论文部分内容阅读
目的利用体外管腔形成模型,研究血管内皮生长因子(VEGF)对肿瘤血管内皮细胞(TECs)调控的精准性,探讨以VEGF为靶点的抗肿瘤药物在临床应用中出现缺陷的潜在机制。方法采用CD31免疫磁珠分选人肝癌标本中的TECs,在含Matrigel基质胶的96孔板中,分别与不同浓度VEGF共培养,观察不同时间的TECs体外管腔形成能力,以正常人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)为对照。结果 1)体外分离培养的TECs拟血管内皮细胞梭状形态,其96%的细胞表达内皮细胞特异性标记CD31;2)TECs在微小量(基础培养条件,2 ng·m L-1)VEGF165时,体外管腔形成较少或不成腔,而对照组HUVECs却能形成明显的管腔并分支成网;当附加10 ng·m L-1VEGF165时,在4 h观察到TECs如同HUVECs形成了管腔,在6 h出现明显的分支网;然而,当附加20 ng·m L-1VEGF165时,在6 h观察到TECs形成的管腔明显减少;统计分析显示,10 ng·m L-1VEGF165组TECs成管能力比2 ng·m L-1VEGF165组高出6倍(P<0.001),而20ng·m L-1VEGF165组TECs成管能力显著下降至10 ng·m L-1VEGF165组的4.5倍(P<0.001);3)10ng·m L-1VEGF165组在培养4、6、8 h均可见TECs管腔形成,但以6 h为显著;在20 h时,TECs的管腔消失,而对照组HUVECs却还有明显的管腔分支网。结论肝癌TECs体外管腔形成对VEGF165既有依赖性但又有量-效局限性,过高VEGF浓度能抑制性影响TECs(而不是HUVECs)管腔形成能力。在VEGF的刺激下,TECs体外管腔形成的时效性短于HUVECs。我们的实验结果提示,临床应用抗VEGF的抗肿瘤药物疗效不一可能与VEGF在TECs体外管腔形成的量效和时效的局限性有关。