三磷酸腺苷联合BMSCs移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hngscg
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目的 三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)可促进脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的修复,通过观察ATP联合BMSCs移植治疗大鼠SCI的疗效,探讨两者在SCI修复中的协同作用及其联合移植治疗SCI的可行性. 方法 取1只体重120 g的雄性SD大鼠股骨和胫骨骨髓,分离获得BMSCs.将第3代BMSCs以BrdU标记,制备浓度为5.0×107个/mL的细胞悬液.将48只体重240~260 g的SD雌性大鼠,采用改良Allen打击法制备T12节段SCI模型后,随机分为4组,每组12只.联合移植组(A组):将ATP(40 mg/kg)与6μL BMSCs细胞悬液混匀后,注射至损伤脊髓撞击中央及距头、尾侧各1mm处,细胞数量约3.0 X 105个;BMSCs移植组(B组)、ATP移植组(C组)及对照组(D组)同A组方法分别移植BMSCs细胞悬液6μL、ATP(40 mg/kg)及PBS(40 mg/kg).术后观察大鼠一般情况,于1、3、7、14、21、28 d采用Tarlov评分及Rivilin斜板实验评分评价后肢功能恢复程度;28 d处死大鼠后取材行组织学和免疫组织化学染色观察SCI修复情况. 结果 术后A组1只,B、C组各2只,D组3只动物因感染或厌食死亡,其余动物均存活至实验完成.各组动物术后均出现后肢瘫痪症状,术后2~3周开始有不同程度恢复,A组最快,B、C组次之,D组最差.术后1、3 d各组间改良Tarlov评分和Rivilin斜板实验评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后7、14、21、28 d除B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).术后28 d组织学观察示,A组大鼠SCI处无明显空洞,损伤区内无明显瘢痕组织,有各种形态细胞形成,部分细胞有明显分化特征;B、C组SCI处可见少量瘢痕组织填充,并有脊髓空洞形成;D组脊髓断端被瘢痕组织填充,可见大量炎性细胞和成纤维细胞浸润,并有较大脊髓空洞形成.免疫组织化学染色观察显示,A、B组可见存活的BrdU标记阳性BMSCs,A组BrdU阳性细胞数多于B组,比较差异有统计学意义(P<0.05);C、D组未见BrdU标记阳性细胞.A组神经微丝蛋白200和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞而积百分比高于B、C、D组,B、C组高于D组,差异均有统计学意义(P0.05). 结论 ATP对损伤后的大鼠脊髓有保护作用,ATP与BMSCs联合移植可促进其损伤脊髓修复.
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