【摘 要】
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探索优化并构建S100A16原核表达载体、制备S100A16蛋白多克隆抗体的条件。试验方法为,将RT-PCR扩增得到的小鼠肝脏组织的S100A16基因克隆片段连接到带有His标签的原核表达载
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院,江苏省药物研究所有限公司
【基金项目】
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江苏省泰州市农业项目(编号:TN2013012)
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探索优化并构建S100A16原核表达载体、制备S100A16蛋白多克隆抗体的条件。试验方法为,将RT-PCR扩增得到的小鼠肝脏组织的S100A16基因克隆片段连接到带有His标签的原核表达载体p ET-28a多克隆位点,并转化大肠杆菌BL21(DE3),用不同温度、不同浓度IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导融合蛋白表达,通过亲和层析柱纯化获得纯化的蛋白质。经免疫动物得到His-S100A16抗血清,通过免疫亲和层析获得了具有高度特异性抗体,通过Western Blot和Elisa检测抗体的特异性和效价,结果表明,在温度25℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L的条件下,可溶性蛋白的表达效果较好。
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