论文部分内容阅读
摘要：目的：研究黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠的抗疲劳作用。方法：将健康雄性小鼠随机分成4组，黄秋葵种子生物碱提取物高剂量组〔8毫升/（公斤·天）〕、中剂量组〔4毫升/（公斤·天）〕、低剂量组〔2毫升/（公斤·天）〕和蒸馏水空白对照组，各实验组连续灌胃给药30天后，测定小鼠负重游泳时间、血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量等指标。结果：黄秋葵种子中生物碱提取物能增强小鼠负重游泳时间，耐力增强，能够降低血液中血清尿素氮含量、血乳酸含量，黄秋葵种子中生物碱提取物能显著提高肝糖原含量。结论：黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠有一定的抗疲劳作用，且高剂量组效果最显著。
关键词：黄秋葵；种子；生物碱；抗疲劳
基金项目：吉林省科技发展重点项目（20120949）
中图分类号：R284111文献标识码：A文章编号：1674-0432（2014）-05-30-3
黄秋葵（（L.）Moench），又名秋葵、补肾草等，原产于印度，为锦葵科Malvaceae秋葵属Abelmoschus一年生草本植物，英文名Okra，广泛栽培于热带、亚热带。20世纪90年代引入我国[1-3]。黄秋葵果实可供食用，具有显著的保健作用，欧美等国都把黄秋葵列入21世纪最佳绿色食品名录。此外，黄秋葵还被许多国家定为运动员的首选蔬菜[6，7]，保健效果好，绿色、安全。
目前，国内外都在加强对黄秋葵的研究，涉及保健、医药、食品等领域，黄秋葵种子的研究则鲜见报道，仅有少数是关于其化学成分及药理作用的研究[11，12]。黄秋葵的种子中脂肪和蛋白质含量较高，还含有较多铁、钾、钙、锰等矿物质元素[9，10]，具有很强的药用价值。所以本次试验重点研究黄秋葵种子中生物碱类提取物的抗疲劳作用，根据文献[13-15]，本次试验重点关注黄秋葵種子中的生物碱类物质，对其进行研究，以期找到黄秋葵种子中抗疲劳作用的物质基础。
1材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
黄秋葵种子由长春市昌达天然植物开发有限公司提供，以下用水除特殊说明外均为GB/T 6682-2008中规定的三级水；昆明种雄性小鼠，购自吉林大学动物实验中心。等级：清洁级，20±5克，实验动物生产许可证号SCXK（吉）2007-0003；游泳箱（40×50×50厘米）自制，水槽中控制水深30厘米，水温控制在（30±2）℃。
1.2黄秋葵种子中生物碱提取物的制备
黄秋葵种子中生物碱提取物由长春理工大学新药研发中心提取，使用前用蒸馏水1∶5混匀。
1.3实验动物分组
将小鼠随机分为4组，每组10只，分别为黄秋葵种子生物碱提取物高、中、低剂量组和空白对照组。各组给予受试物剂量分别为（以体质量计）：高剂量组黄秋葵种子生物碱提取物8毫升/公斤；中剂量组黄秋葵种子生物碱提取物4毫升/公斤；低剂量组黄秋葵种子生物碱提取物2毫升/公斤；空白对照组给予蒸馏水8毫升/公斤。各实验组连续灌胃给药30天，观察记录小鼠的皮毛颜色及情绪，之后测定小鼠负重游泳时间，血液中血清尿素氮、血乳酸含量、肝糖原含量。
1.4方法
1.4.1小鼠体质量的测定首次灌胃前记录各实验组小鼠体质量，并观察小鼠精神状态、皮毛色泽变化、末次给药后游泳前再次记录各组小鼠体质量，对比实验前后体质量变化情况。
1.4.2负重游泳实验各实验组连续灌胃30天，末次给药30分钟后，给小鼠负重铅皮（体重5%），放入水温30℃、水深为30厘米的游泳箱中游泳，当小鼠头部沉入水中10秒仍不能返回水面视为力竭，记录小鼠从放入泳池到力竭的时间[17]。
1.4.3血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量的测定各实验组小鼠负重游泳力竭后取出，15分钟后摘眼球取血，试剂盒法测定血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量[18]。
注：*与空白对照组相比，存在显著差异（P<0.05），**极显著性差异（P<0.01）。
从表1可以看出，与空白对照组相比，黄秋葵种子生物碱提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠的体质量变化情况并不明显，说明给药组并未对小鼠体重产生影响，在统计学上没有显著性差异（P>0.05）。
2.2黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影响
各组小鼠负重（铅皮）游泳致力竭，记录并统计从开始致其力竭的游泳时间，结果见表2。
表2黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影响（±s，n=10）
注：*与空白对照组相比，存在显著差异（P<0.05），**极显著性差异（P<0.01）。
从表2可以看出，黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组的小鼠负重力竭游泳时间均明显长于空白对照组，在统计学上具有显著性的差异（P<0.01）。
2.3黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠运动后血清尿素氮、血乳酸和肝糖原的影响
各实验组小鼠游泳力竭后取出，15分钟后摘眼球取血测定血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量变化，并统计各组小鼠运动后血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量，结果见表3。
表3黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠运动后血乳酸、血清尿素氮、和肝糖原的影响（±s， n=10）
注：*与空白对照组相比，存在显著差异（P<0.05）；**有极显著性差异（P<0.01）。
从表3可以看出，游泳运动后，黄秋葵种子生物碱提取物高、中剂量组与空白组相比血清尿素氮和血乳酸的含量均明显降低，具有统计学意义，有显著的差异（P<0.01）；并且具有显著差异（P<0.05）。各项检测指标中，各给药组呈现出明显的量效关系。
3讨论
3.1黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠体质量的影响
灌喂黄秋葵种子生物碱提取物后对小鼠体质量变化无显著影响，属于正常体重变化。对实验不产生复杂影响。 3.2黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影响
运动耐力的下降最直观的表现为疲劳。而力竭游泳时间是测试运动耐力的最明显的指标[18]。生物碱类化合物多具有抗疲劳作用，研究结果也显示，黄秋葵种子生物碱提取物的小鼠明显增长负重力竭游泳时间，具有极显著性差异（P<0.01），说明黄秋葵种子生物碱提取物确实能提高小鼠的抗疲劳能力。
3.3黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝糖原的影响
黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组小鼠经过运动后，其血液中乳酸含量比空白对照组降低很多，具有统计学意义，且有极显著性的差异（P<0.01）。各实验组呈现量效关系，说明黄秋葵种子生物碱提取物可显著抑制小鼠运动引起的血乳酸升高，有助于缓解运动负荷引起的疲劳，从而延长小鼠力竭游泳时间。
血清尿素氮是评价机体耐受力的重要指标，各国对此共识相同[20，22]。结果显示黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组的小鼠运动后血清尿素氮含量显著降低，其中高剂量组血清中尿素氮含量最低，数据具有统计学意义，且具有极显著性差异（P<0.01），说明黄秋葵种子生物碱提取物确能提高小鼠对运动负荷的承受能力，从而提高其抗疲劳能力。
运动导致的体力衰竭总是伴随肌糖原的降解代谢，机体为了维持正常的血糖水平，必将将代谢肝糖原，以补充消耗，因此肝糖原是反映疲劳程度的一项重要指标[22]。本研究结果显示，黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组小鼠肝糖原含量均明显高于空白对照组，具有统计学意义，且有显著性差异（P<0.05，P<0.01）。
4结论
通过本次实验测定血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原生化指标为阳性，可判定黄秋葵种子生物碱提取物具有一定的抗疲劳作用，存在深入开发价值。
参考文献
[1]于英杰.黄秋葵的栽培技术[J].农村新技术，2004，（3）： 10-11.
[2]龚衍兰，戴雪花.黄秋葵高质优产栽培技术[J].特种经济动植物，2004，7（5）： 40.
[3]李庆林，王成永，彭代银，等.黄蜀葵花总黄酮对心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究[J].中国实验方剂学杂志， 2006，12（2）： 39-42.
[4]谭业华，陈珍，顾种宜.中草药黄蜀葵的研究现状与展望[J].海南师范学院学报（自然科学版），2006，19（2）：163-167.
[5]范丽，袁丽萍，陈志武，等.黄蜀葵花总黄酮药理性预适应对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国药学杂志， 2005，40（11）： 836-839.
[6]董彩文，梁少华.黄秋葵的功能特性及综合开发利用[J].食品研究与开发，2007，28（5）： 180-182.
[7]高雷，張平，程刚.黄蜀葵花的研究进展[J].安徽医药， 2008，12（3）：198-200.
[8] Anwar F，Rashid U，Ashraf M，et al.Okra （ Hibiscus esculentus） seed oil for biodiesel production[J].Applied Energy， 2010，87：779-785.
[9]黄阿根，陈学好，高云中，等.黄秋葵的成分测定与分析[J].食品科学，2007，28（10）：451-455.
[10] Adelakun O E，QyeladeO J，Ade-omowaye B I，et al. Chemical composition and the antioxidative properties of Nigerian Okra seed（ Abelmoschus esculentus Moench） flour.Food Chem Toxicol，2009，47（6）：1123-1126.
[11]李建华，陈珊.黄秋葵水提液抗疲劳的药效学观察[J].中国运动医学杂志，2004，23（2）：196-197.
[12]茅国夫.黄秋葵的特征特性及栽培技术[J].浙江农业科学，2004，（6）：353.
[13]孙宏，张宏波，谷振华.茶叶中提取咖啡碱实验方法比较[J].高师理科学刊，2007，27（1）：40-41.
[14]刘军红，廖国玲.生物碱提取、分离和纯化的研究进展[J].时珍国医国药，2007，18（5）：1230-1231.
[15]李晓林，鹿海真，张坦东，等.茶叶中提取天然咖啡碱的方法改进[J].山东师范大学学报（自然科学版），2007，22（2）：139-140.
[16]张万明.自茶叶中提取咖啡碱实验教学探索与研究[J].化学教育，2007，28（1）：51-52.
[17]中华人民共和国卫生部.全国临床检验操作规程（第三版）[M]，南京：东南大学出版社，2006：464-465.
[18]何来英，严卫星，楼密密，等.保健食品抗疲劳作用试验方法研究[J].中国食品卫生杂志，1997，9（4）：1-24.
[19]曾五一，肖红叶，统计学导论[M].北京：科学出版社， 2007： 340-352.
[20]徐国栋，骆清铭.运动时的血乳酸与血红蛋白饱和度关系的研究：一种新型血红蛋白含量测定法[J].武汉体育学院学报，2001，35（3）： 40-42.
[21]裴素萍，冯晓慧，金迪，等. 3种药膳对小鼠抗疲劳的效果[J].解放军预防医学杂志，2009，6（5）： 335-337.
[22]中华人民共和国卫生部.保健食品的功能学评价程序和检验方法[M].
作者简介：徐明，吉林农业大学食品科学与工程学院，硕士研究生，研究方向：农产品食品加工工艺与应用。
通讯作者：郑鸿雁，硕士研究生，副教授，研究方向：功能食品、微生物菌种筛选及发酵工艺研究。
关键词：黄秋葵；种子；生物碱；抗疲劳
基金项目：吉林省科技发展重点项目（20120949）
中图分类号：R284111文献标识码：A文章编号：1674-0432（2014）-05-30-3
黄秋葵（（L.）Moench），又名秋葵、补肾草等，原产于印度，为锦葵科Malvaceae秋葵属Abelmoschus一年生草本植物，英文名Okra，广泛栽培于热带、亚热带。20世纪90年代引入我国[1-3]。黄秋葵果实可供食用，具有显著的保健作用，欧美等国都把黄秋葵列入21世纪最佳绿色食品名录。此外，黄秋葵还被许多国家定为运动员的首选蔬菜[6，7]，保健效果好，绿色、安全。
目前，国内外都在加强对黄秋葵的研究，涉及保健、医药、食品等领域，黄秋葵种子的研究则鲜见报道，仅有少数是关于其化学成分及药理作用的研究[11，12]。黄秋葵的种子中脂肪和蛋白质含量较高，还含有较多铁、钾、钙、锰等矿物质元素[9，10]，具有很强的药用价值。所以本次试验重点研究黄秋葵种子中生物碱类提取物的抗疲劳作用，根据文献[13-15]，本次试验重点关注黄秋葵種子中的生物碱类物质，对其进行研究，以期找到黄秋葵种子中抗疲劳作用的物质基础。
1材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
黄秋葵种子由长春市昌达天然植物开发有限公司提供，以下用水除特殊说明外均为GB/T 6682-2008中规定的三级水；昆明种雄性小鼠，购自吉林大学动物实验中心。等级：清洁级，20±5克，实验动物生产许可证号SCXK（吉）2007-0003；游泳箱（40×50×50厘米）自制，水槽中控制水深30厘米，水温控制在（30±2）℃。
1.2黄秋葵种子中生物碱提取物的制备
黄秋葵种子中生物碱提取物由长春理工大学新药研发中心提取，使用前用蒸馏水1∶5混匀。
1.3实验动物分组
将小鼠随机分为4组，每组10只，分别为黄秋葵种子生物碱提取物高、中、低剂量组和空白对照组。各组给予受试物剂量分别为（以体质量计）：高剂量组黄秋葵种子生物碱提取物8毫升/公斤；中剂量组黄秋葵种子生物碱提取物4毫升/公斤；低剂量组黄秋葵种子生物碱提取物2毫升/公斤；空白对照组给予蒸馏水8毫升/公斤。各实验组连续灌胃给药30天，观察记录小鼠的皮毛颜色及情绪，之后测定小鼠负重游泳时间，血液中血清尿素氮、血乳酸含量、肝糖原含量。
1.4方法
1.4.1小鼠体质量的测定首次灌胃前记录各实验组小鼠体质量，并观察小鼠精神状态、皮毛色泽变化、末次给药后游泳前再次记录各组小鼠体质量，对比实验前后体质量变化情况。
1.4.2负重游泳实验各实验组连续灌胃30天，末次给药30分钟后，给小鼠负重铅皮（体重5%），放入水温30℃、水深为30厘米的游泳箱中游泳，当小鼠头部沉入水中10秒仍不能返回水面视为力竭，记录小鼠从放入泳池到力竭的时间[17]。
1.4.3血清尿素氮、血乳酸、肝糖原含量的测定各实验组小鼠负重游泳力竭后取出，15分钟后摘眼球取血，试剂盒法测定血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量[18]。
注：*与空白对照组相比，存在显著差异（P<0.05），**极显著性差异（P<0.01）。
从表1可以看出，与空白对照组相比，黄秋葵种子生物碱提取物高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠的体质量变化情况并不明显，说明给药组并未对小鼠体重产生影响，在统计学上没有显著性差异（P>0.05）。
2.2黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影响
各组小鼠负重（铅皮）游泳致力竭，记录并统计从开始致其力竭的游泳时间，结果见表2。
表2黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影响（±s，n=10）
注：*与空白对照组相比，存在显著差异（P<0.05），**极显著性差异（P<0.01）。
从表2可以看出，黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组的小鼠负重力竭游泳时间均明显长于空白对照组，在统计学上具有显著性的差异（P<0.01）。
2.3黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠运动后血清尿素氮、血乳酸和肝糖原的影响
各实验组小鼠游泳力竭后取出，15分钟后摘眼球取血测定血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量变化，并统计各组小鼠运动后血清中尿素氮、乳酸和肝糖原的含量，结果见表3。
表3黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠运动后血乳酸、血清尿素氮、和肝糖原的影响（±s， n=10）
注：*与空白对照组相比，存在显著差异（P<0.05）；**有极显著性差异（P<0.01）。
从表3可以看出，游泳运动后，黄秋葵种子生物碱提取物高、中剂量组与空白组相比血清尿素氮和血乳酸的含量均明显降低，具有统计学意义，有显著的差异（P<0.01）；并且具有显著差异（P<0.05）。各项检测指标中，各给药组呈现出明显的量效关系。
3讨论
3.1黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠体质量的影响
灌喂黄秋葵种子生物碱提取物后对小鼠体质量变化无显著影响，属于正常体重变化。对实验不产生复杂影响。 3.2黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠负重力竭游泳时间的影响
运动耐力的下降最直观的表现为疲劳。而力竭游泳时间是测试运动耐力的最明显的指标[18]。生物碱类化合物多具有抗疲劳作用，研究结果也显示，黄秋葵种子生物碱提取物的小鼠明显增长负重力竭游泳时间，具有极显著性差异（P<0.01），说明黄秋葵种子生物碱提取物确实能提高小鼠的抗疲劳能力。
3.3黄秋葵种子生物碱提取物对小鼠血清尿素氮、血乳酸、肝糖原的影响
黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组小鼠经过运动后，其血液中乳酸含量比空白对照组降低很多，具有统计学意义，且有极显著性的差异（P<0.01）。各实验组呈现量效关系，说明黄秋葵种子生物碱提取物可显著抑制小鼠运动引起的血乳酸升高，有助于缓解运动负荷引起的疲劳，从而延长小鼠力竭游泳时间。
血清尿素氮是评价机体耐受力的重要指标，各国对此共识相同[20，22]。结果显示黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组的小鼠运动后血清尿素氮含量显著降低，其中高剂量组血清中尿素氮含量最低，数据具有统计学意义，且具有极显著性差异（P<0.01），说明黄秋葵种子生物碱提取物确能提高小鼠对运动负荷的承受能力，从而提高其抗疲劳能力。
运动导致的体力衰竭总是伴随肌糖原的降解代谢，机体为了维持正常的血糖水平，必将将代谢肝糖原，以补充消耗，因此肝糖原是反映疲劳程度的一项重要指标[22]。本研究结果显示，黄秋葵种子生物碱提取物各剂量组小鼠肝糖原含量均明显高于空白对照组，具有统计学意义，且有显著性差异（P<0.05，P<0.01）。
4结论
通过本次实验测定血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原生化指标为阳性，可判定黄秋葵种子生物碱提取物具有一定的抗疲劳作用，存在深入开发价值。
参考文献
[1]于英杰.黄秋葵的栽培技术[J].农村新技术，2004，（3）： 10-11.
[2]龚衍兰，戴雪花.黄秋葵高质优产栽培技术[J].特种经济动植物，2004，7（5）： 40.
[3]李庆林，王成永，彭代银，等.黄蜀葵花总黄酮对心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究[J].中国实验方剂学杂志， 2006，12（2）： 39-42.
[4]谭业华，陈珍，顾种宜.中草药黄蜀葵的研究现状与展望[J].海南师范学院学报（自然科学版），2006，19（2）：163-167.
[5]范丽，袁丽萍，陈志武，等.黄蜀葵花总黄酮药理性预适应对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国药学杂志， 2005，40（11）： 836-839.
[6]董彩文，梁少华.黄秋葵的功能特性及综合开发利用[J].食品研究与开发，2007，28（5）： 180-182.
[7]高雷，張平，程刚.黄蜀葵花的研究进展[J].安徽医药， 2008，12（3）：198-200.
[8] Anwar F，Rashid U，Ashraf M，et al.Okra （ Hibiscus esculentus） seed oil for biodiesel production[J].Applied Energy， 2010，87：779-785.
[9]黄阿根，陈学好，高云中，等.黄秋葵的成分测定与分析[J].食品科学，2007，28（10）：451-455.
[10] Adelakun O E，QyeladeO J，Ade-omowaye B I，et al. Chemical composition and the antioxidative properties of Nigerian Okra seed（ Abelmoschus esculentus Moench） flour.Food Chem Toxicol，2009，47（6）：1123-1126.
[11]李建华，陈珊.黄秋葵水提液抗疲劳的药效学观察[J].中国运动医学杂志，2004，23（2）：196-197.
[12]茅国夫.黄秋葵的特征特性及栽培技术[J].浙江农业科学，2004，（6）：353.
[13]孙宏，张宏波，谷振华.茶叶中提取咖啡碱实验方法比较[J].高师理科学刊，2007，27（1）：40-41.
[14]刘军红，廖国玲.生物碱提取、分离和纯化的研究进展[J].时珍国医国药，2007，18（5）：1230-1231.
[15]李晓林，鹿海真，张坦东，等.茶叶中提取天然咖啡碱的方法改进[J].山东师范大学学报（自然科学版），2007，22（2）：139-140.
[16]张万明.自茶叶中提取咖啡碱实验教学探索与研究[J].化学教育，2007，28（1）：51-52.
[17]中华人民共和国卫生部.全国临床检验操作规程（第三版）[M]，南京：东南大学出版社，2006：464-465.
[18]何来英，严卫星，楼密密，等.保健食品抗疲劳作用试验方法研究[J].中国食品卫生杂志，1997，9（4）：1-24.
[19]曾五一，肖红叶，统计学导论[M].北京：科学出版社， 2007： 340-352.
[20]徐国栋，骆清铭.运动时的血乳酸与血红蛋白饱和度关系的研究：一种新型血红蛋白含量测定法[J].武汉体育学院学报，2001，35（3）： 40-42.
[21]裴素萍，冯晓慧，金迪，等. 3种药膳对小鼠抗疲劳的效果[J].解放军预防医学杂志，2009，6（5）： 335-337.
[22]中华人民共和国卫生部.保健食品的功能学评价程序和检验方法[M].
作者简介：徐明，吉林农业大学食品科学与工程学院，硕士研究生，研究方向：农产品食品加工工艺与应用。
通讯作者：郑鸿雁，硕士研究生，副教授，研究方向：功能食品、微生物菌种筛选及发酵工艺研究。