【摘 要】
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目的:制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),研究其对肿瘤治疗的作用.方法:用RT-PCR方法扩增人β3胞膜外基因,将其克隆至原核表达载体pQE30中,获得含β3胞膜外基因的高效
【机 构】
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复旦大学医学院,上海,200032上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫学研究室,上海,200032;上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫学研究室,上海,200032;
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目的:制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),研究其对肿瘤治疗的作用.方法:用RT-PCR方法扩增人β3胞膜外基因,将其克隆至原核表达载体pQE30中,获得含β3胞膜外基因的高效表达载体pQE30-β3,将其转化大肠杆菌M15,通过诱导表达及纯化,获得β3蛋白.将此蛋白免疫BALB/c小鼠,应用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗β3亚基mAb,Western blot鉴定mAb的特异性.通过小鼠体内抑制黑色素瘤生长实验筛选出具有抑制肿瘤生长作用的mAb.进一步用MTT法及流式细胞术观察该mAb体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及诱导其凋亡的作用.结果:扩增获得了β3胞膜外基因,构建了β3蛋白的原核表达载体,表达纯化了β3蛋白,成功制备了8株mAb,Western blot证明了其特异性.经过体内抑瘤实验筛选出一株具有显著抑制肿瘤生长的mAb 4F12.该mAb可抑制HUVEC细胞增殖并诱导其凋亡.结论:成功表达了β3蛋白,并制备了有活性的mAb,抗体具有抑制肿瘤生长的作用,这可能是通过抑制血管内皮细胞的增殖和诱发凋亡实现的.
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