【摘 要】
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蛋白质药物因其独特的优势,在疾病的预防和治疗中发挥了极其重要的作用,但大分子的特性阻碍了其对细胞内靶标的作用.现有的递送策略中,由于穿膜肽更适用于临床研究和治疗,逐渐成为了递送蛋白质药物最主要的工具.因此,开发安全有效的穿膜肽类递送载体对于生物医药的基础研究及临床应用具有重要意义.文中设计了一种基于肠毒素A2结构域的自释放型细胞内运输载体LCA2,该载体由连接子Linker、自释放酶敏感位点Cs与穿膜结构域LTA2三部分组成,并以荧光蛋白质mCherry为模式蛋白质来检测该载体的性质.电泳结果显示,从含有
【机 构】
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太原师范学院生物系天然生物活性成分创制兽药工程中心,山西晋中030619;山西农业大学动物科技学院动物生产系,山西太谷030801;华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室,上海20023
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蛋白质药物因其独特的优势,在疾病的预防和治疗中发挥了极其重要的作用,但大分子的特性阻碍了其对细胞内靶标的作用.现有的递送策略中,由于穿膜肽更适用于临床研究和治疗,逐渐成为了递送蛋白质药物最主要的工具.因此,开发安全有效的穿膜肽类递送载体对于生物医药的基础研究及临床应用具有重要意义.文中设计了一种基于肠毒素A2结构域的自释放型细胞内运输载体LCA2,该载体由连接子Linker、自释放酶敏感位点Cs与穿膜结构域LTA2三部分组成,并以荧光蛋白质mCherry为模式蛋白质来检测该载体的性质.电泳结果显示,从含有pET24a(+)-ma2重组质粒的工程菌中获得了高纯度的mCherry-LCA2融合蛋白,且低浓度的胰蛋白酶就可将mCherry从LCA2上有效地分离;荧光显微镜下观察到LCA2能将与之连接的mCherry运输到不同类型的细胞中,流式细胞仪检测到LCA2的运输能力具有一定的细胞差异性.共聚焦显微镜的荧光分析和Western印迹结果显示,LCA2载体将mCherry蛋白运送到内质网,Cs酶敏感位点被切开,模式蛋白质mCherry与LCA2分离并释放到细胞内.CCK-8结果表明,在给药剂量5～40μg/mL范围内,细胞增殖活力未见显著变化.上述结果证明,LCA2是一种安全有效的自释放型递送栽体,能够将活性蛋白质或蛋白质药物运输到细胞内质网并释放.
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环状RNA(circRNA)是一类闭合环状结构的新型非编码RNA,广泛分布于各种组织中.与传统的线性RNA相比,circRNA不具有5\'-和3\'-末端,不会轻易被核酸外切酶降解,能够稳定存在于多种体液且进化保守,目前已成为临床非编码RNA的重点研究对象.恶性肿瘤具有发现晚、进展快、易复发等特点,目前尚缺乏有效的治疗方式,其发病率和死亡率一直居高不下.如何对其进行早期诊断、治疗干预以及预后评估,是当代医学研究的重点和热点之一.CDR1as是研究最为广泛的circRNA.它能够通过海绵微RNA (
骨骼肌是人和家畜重要的组织,骨骼肌发育调控机制的研究对于肌肉疾病的诊断治疗和家畜肉质改善具有重要意义.骨骼肌发育受MyoD、Myf5、Mrf4和Mef2等因子以及AKT/mTOR、p38/MAPK和Wnt/β-catenin等信号通路的调节,此外,lncRNA、miRNA和circRNA等非编码RNA也被陆续证明可以调控骨骼肌发育.但骨骼肌发育调控的详细机制仍存在许多未知.tRNA由76～90个核苷酸组成,主要功能是通过转运氨基酸参与蛋白质的合成,并涉及应激信号转导.此外,在压力应激条件下,tRNA会被多
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