尿激酶催化结构域在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶

来源 :生物化学与生物物理进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liongliong515

【摘要】

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利用重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域的突变体基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化酵母X-33,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化,

【作者】

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赵更香袁彩卞传兵江龙光叶晓明黄子详黄

【机构】

：

中国科学院福建物质结构所结构化学国家重点实验室中国科学院研究生院

【出处】

：

生物化学与生物物理进展

【发表日期】

：

2006年04期

【关键词】

：

尿激酶 Pichiapastoris 纤溶酶原重叠延伸PCR 结晶

【基金项目】

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国家自然科学基金重点资助项目(30430190);结构化学国家重点实验室项目(021061);中国科学院百人计划资助项目.

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利用重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域的突变体基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化酵母X-33,用Zeocin筛选高拷贝数的酵母菌落.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化,纯度达到99%,该仅含尿激酶催化结构域的突变体(C279A/N302Q),无需激活即具有尿激酶活性.用气相扩散法获得蛋白质晶体,其衍射分辨率达1.45!.

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