【摘 要】
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目的 克隆结核分枝杆菌MPT64基因全长,构建毕赤酵母分泌型表达载体,获得表达MPT64的重组毕赤酵母工程菌.方法 利用PCR技术扩增MPT64基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZαA
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目的 克隆结核分枝杆菌MPT64基因全长,构建毕赤酵母分泌型表达载体,获得表达MPT64的重组毕赤酵母工程菌.方法 利用PCR技术扩增MPT64基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPICZαA中;将正确的表达载体线性化后,电击导入到毕赤酵母GS115中,ZeocinTM抗性筛选正确的重组子;SDS-PAGE及Western-blot鉴定分泌表达MPT64的重组毕赤酵母.结果 克隆获得了正确的MFITM酵母分泌表达载体,并获得了相应的重组酵母株,该重组子经甲醇诱导培养后能分泌大小约30kDa的蛋白,该蛋白能特异地与His抗体结合.结论 本实验获得了酵母重组的结核杆菌MPT64蛋白,为探讨其生物学性能和临床上的应用奠定了实验摹础.
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