【摘 要】
：
目的 构建稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和嘌呤霉素(puromycin)抗性的K562-PM-RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选.方法 采
【机 构】
：
重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心,重庆大学生物工程学院
论文部分内容阅读
目的 构建稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和嘌呤霉素(puromycin)抗性的K562-PM-RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选.方法 采用PCR法获得RFP片段,将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES-Puromycin 载体中获得pGC-PM-RFP重组质粒,经脂质体转染到293T 细胞中获得慢病毒LV-PM-RFP,有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率,用包装获得的慢病毒感染K562细胞,经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM-RFP细胞株.结果 PCR及测序结果证实目的 基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中,经慢病毒LV-PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活,并稳定表达RFP.结论 成功构建了慢病毒重组质粒pGC-PM-RFP,并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM-RFP细胞株.
其他文献
目的:探讨picc在肿瘤治疗中的应用方法及效果,并探讨有效的护理方法.方法:将我院近2年收治的80例肿瘤患者随机分为观察组与参考组各为40例,2组患者均接受picc输入化疗药物,分
通过化学成分分析、力学性能测定、金相组织检验以及断口的宏观、微观分析等方法,对抽油泵轴的断裂原因进行了探讨,从而找出其断裂原因,并对抽油泵轴用管的生产工艺提出了改
电气技术下的铁路牵引技术能够对铁路系统的故障进行分析，本文通过分析录波系统自身存在的缺陷，分析了异地同步系统进行录波的主要方法，能够在一定程度上分析录波系统的组成原则
通过金相、扫描电镜观察、能谱分析和力学性能检测,研究了加入Ce后202不锈钢的强度、塑性、冲击韧性变化。在相同的热处理工艺条件下,分别加入不同含量的Ce,与不添加Ce的202
随着经济发展与国力强盛，我国已成为世界上十大塑料制品生产和消费国之一，但塑料用品大多被丢弃在环境中，造成严重，而且因其难以降解，对生态环境造成潜在危害。本文通过对塑料利弊
目的 比较软包装输液袋贴膜式组合盖与拉环式组合盖临床使用的便利性.方法 以贴膜式组合盖的软包装输液袋为实验组(300袋),以拉环式组合盖的软包装输液袋为对照组(300袋).选
目的 探讨心房颤动（房颤）患者经过房室结消融后心脏再同步治疗(CRT)的临床疗效。方法 将80例在本院接受CRT的心功能不良患者按术前心律分为两组：房颤组（15例）、窦性心律组(65例)，房
目的 了解拉萨市城乡居民高血压的患病情况和主要影响因素,为采取有针对性的防治措施提供科学依据.方法 采用系统分层随机抽样方法,对拉萨市三县一区中1370例≥18岁的常住居
目的 研究长期家庭无创正压通气(non-invasive positive pressure ventilation,NIPPV)在治疗重度慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)中的作用.方法 根据慢性阻塞性肺疾病诊断指南制定的标准,收集2002年6月至2009年12月山东地区使用家庭NIPPV 12个月以上的96例重度COPD患者
目的:研制吗替麦考酚酯片并考察其体外溶出度。方法:采用中心组合设计法优化处方工艺,以微晶纤维素的用量和羧甲基淀粉钠的用量为考察因素,溶出度为评价指标,分别用线性模型