高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

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为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性 PRRSV 毒株(HP-PRRSV),根据 PRRSV 囊膜蛋白 GP2基因保守序列和 HP-PRRSV 特有的 Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法 RT-PCR 不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株 PRRSV 以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株 PRRSV 毒株并准确鉴别其中7株 HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对 PRRSV、HP-PRRSV 病毒液的检测低限均小于每个反应0.5 TCID50;其组内、组间检测变异系数均<10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光 RT-PCR 试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测 PRRSV 提供了一种新的分子生物学检测方法。
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