精子蛋白SP22在毕赤氏酵母中的表达、纯化和鉴定

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目的:克隆人睾丸精子蛋白SP22基因在毕赤氏酵母中表达,并对表达产物进行纯化和鉴定.方法:RT-PCR克隆出睾丸SP22基因,导入pGEM-T克隆载体.再亚克隆到酵母真核分泌型表达载体pHIL-S1.电击转化将重组质粒pHIL-S1/SP22导入GS115酵母菌株.筛选出阳性克隆,以甲醇诱导分泌表达.镍离子亲和层析法从培养上清中纯化目的蛋白.结果:SP22编码序列与人致癌基因DJ1基本相同.重组质粒正确插入酵母基因组后,甲醇诱导SP22表达并分泌至培养上清中,表达量约占上清总蛋白的20%.纯化出的目的蛋白
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