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【摘 要】目的：观察通心络胶囊的工艺制备及治疗血栓栓塞性疾病的药理分析实验数据。方法：采用寒冷刺激加肾上腺素造成血瘀模型等方法，观察通心络胶囊的药理作用。结果：模型组与正常组比较，有延长小鼠凝血及出血时间的趋势（P<0.05或P<0.01）；模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态；能延长小鼠存活率（P<0.05或P<0.01）。结论：通心络胶囊制备工艺简便，质量易于控制，药理疗效明显，能明显延长小鼠凝血时间、显著降低血瘀大鼠的血小板聚集作用。
【关键词】血栓栓塞性疾病；药理学；通心络胶囊/制备工艺；小鼠/大鼠
【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）02-0162-02
血栓形成（thrombosis）是指在一定条件下，血液有形成分在血管内（多数为小血管）形成栓子，造成血管部分或完全堵塞，相应部位血液供应障碍的病理过程。依血栓组成成分可分为血小板血栓、红细胞血栓、纤维蛋白血栓、混合血栓等。按血管种类可分为动脉性血栓、静脉性血栓及毛细血管性血栓。血栓栓塞（thromboembolism）是血栓由形成部位脱落，在随血流移动的过程中部分或全部堵塞某些血管，引起相应组织和（或）器官缺血、缺氧、坏死（动脉血栓）及淤血、水肿（静脉血栓）的病理过程。近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，静脉血栓栓塞导致的死亡排在心脑血管疾病和恶性腫瘤之后的第三位，严重危害人类的健康。因此，寻求积极的预防及治疗方法尤为重要，本文通过做动物实验的方法，观察通心络胶囊治疗血栓栓塞性疾病的实验数据，进一步探讨其作用机理，为临床应用提供安全、有效的方法，报道如下：
1 制备工艺
1.1 药物组成：地龙9g，僵蚕9g，海风藤12g，续断12g，天南星（制）6g，水蛭9g，炮山甲9g，苏木12g。
1.2 制法：将以上中药按照配方配料，先行炮制、烘干、粉碎、过100目筛、混匀，取上述药粉装0号胶囊，使每粒胶囊装药粉0.4g即得。
1.3 制备工艺流程 炮制→配料→烘干→粉碎→过100目筛→混匀→装0号胶囊→检验→合格→入库
1.4 质量控制标准 【性状】本品为胶囊剂，其内容物为浅黄色粉末、味苦。【鉴别】（1）取本品内容物粉末2g，加石油醚（60—90℃）10ml，超声处理30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加石油醚（60—90℃）1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂对照药材l g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅酸G薄层板上，以石油醚（60—90℃）一乙酸乙酯一醋酸（10：3：0.1）为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
（2）取本品内容物粉末1 g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取仙灵脾对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸收上述二种溶液备5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯一乙醇一水（8：2：1）为展开剂，展开、取出、晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点或荧光斑点。（3）取本品内容物粉末lg加乙酸乙酯4ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄芪对照品，加甲醇制成每l ml含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅酸G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（20：4：0.5）为展开剂，展开、取出、晾十、喷以硫酸乙醇溶液（3→1 0），在80℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，显相同的橙红荧光班点。（4）取本品内容物粉末0.5g，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇1 5分钟，静置；吸取上清液，作为供试品溶液。另取益智仁对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维互钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯一甲酸一水一甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开、取出、晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】：本品应符合胶囊剂项下有关的各项规定（参照《中国药典》2005年版一部附录IL）【功能主治】：本品具有健脾益肾、清利湿热，解毒化瘀之功。主治急慢性肾炎等症。
2 实验材料
2.1 药品 通心络胶囊（处方组成：地龙9g，僵蚕9g，海风藤12g，续断12g，天南星（制）6g，水蛭9g，炮山甲9g，苏木12g。将以上中药按照配方配料，先行炮制、烘干、粉碎、过100目筛、混匀，取上述药粉装0号胶囊，使每粒胶囊装药粉0.4g即得。临用前用蒸馏水配成不同浓度备用。
2.2 阳性对照药 消栓通络片，批号：20080601。
2.3 试剂 戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，批号WS20080401；胶原蛋白，Sig ma，批号：9879；盐酸肾上腺素.批号：0809301；冰醋酸，批号：08083l；氢氧化钠，批号：2008228；活化部分凝血活酶（APTT）时间测定试剂盒，北京世堂帝科学仪器公司，批号：STG2020l-27；凝血活酶原（TT）时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：STGl010l-27；凝血酶（TT）时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号STG20802-19；血小板诱导剂（ADP），北京世帝科学仪器公司。 2.4 动物 二级昆明种小鼠，雄雌各半，体重1 8～22g；SD大鼠，雌雄各半，体重250～350g，均由第四军医大学实验动物研究中心提供，生产合格征号：scxk（军）宁第2002-005号。
3 方法和结果
3.1 通心络胶囊对凝血功能的影响 60只小鼠随机分为正常、阳性、消栓通0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，每组l 2只，每天给药1次，连续给药14d，于末次给药后lh，将小鼠尾尖1 cm处用利剪剪断，它即秒表开始计时，至血液凝固为止即为出血时间[1]。血液自动流出.用滤纸吸去第1滴血后，将血滴于清洁载玻片两端各1滴，立即秒表开始计时，用 6号干燥针头沿血滴边缘向里轻轻挑动血滴，至针头能挑起纤维蛋白丝为止.即为凝血时间。
结果（见表1）显示通心络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势（P<0.05或P<0.01）。
3.2 通心络胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率及凝血因子的影响 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、通心络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg六个剂量组，除正常对照组外，各组均造成血瘀模型。造模：参照文献[2]复制血瘀模型，但盐酸肾上腺素（Adr）的剂量及冰冻时间有所改变，具体操作如下：将1mg/mL的Adr用生理鹽水稀释1倍，第1d每隔4h皮下注射0.2mL稀释后的Adr，共给3次。在每2次给药的中间时间将大鼠放入0～2℃冰水中4min进行冷刺激；第2d仍按的日剂量给予2次Adr （间隔4h），在2次给药的中间时间将大鼠放入冰水中3min进行1次冷刺激，模型即造成。48h后大鼠1%戊巴比妥钠（40mg/kg）行腹腔麻醉，腹腔静脉取血，置于3.8枸橼酸钠抗凝管中。离心，测定血小板聚集率和凝血因子[3]。结果（见表2～3）与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；通心络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异（P<0.05或P<0.01）。
3.3 通心络胶囊对胶原蛋白肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成的影响 取小鼠60只，雌雄各半，随机分成正常组、阳性组、通心络胶囊0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，给药1 4d，各组于末次给药后1h，每只小鼠尾静脉注射胶原蛋白肾上腺素混合血栓诱导剂[4]，结果（见表4） 表明通心络胶囊0 .50g/kg、1.00g/kg给药1 4d与模型组比较，能明显增加小鼠存活率（P<0.05或P<0.01）。
4 讨论
近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，严重危害人类的健康。血小板的粘附、聚集、释放反应可导致血栓形成、动脉粥样硬化等心脑血管疾病[5]。因此活血化瘀、通经活络是其主要的治疗原则。通心络胶囊由地龙、海风藤、续断、炮山甲、僵蚕、天南星（制）、水蛭等组成，具有活血化瘀，温经通络，祛风定惊，散结止痛的功效，用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、言语迟涩、发音不清、口眼歪斜、肢体麻木，半身不遂及动脉硬化症。临床上取得了良好的疗效。对大鼠造成血瘀模型，发现与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；通心络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异（P<0. 05或P<0.01）。凝血时间实验结果显示，通心络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势（P<0. 05或P<0.01）。胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成结果，表明通心络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与模型组比较，能明显增加小鼠存活率（P<0. 05或P<0.01）。表明通心络胶囊可以在活体中显示出抗血栓作用，本实验为通心络胶囊的临床疗效提供了药理学依据。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药政管理局中药新药研究指南（药学药理学毒理学）：[M].2004：172
[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2004：564-566
[3] 张强宗，刘俊田，史小莲，等.水蛭免加热提取物对高凝动物模型凝血系统及血小板聚集率的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006。1 2（5）：47-49.
[4] 谢辉.许惠琴.李 虹.韭白向提取物对小鼠凝血时间及体内血栓形成的影响[J]时珍国医国药.2004.1 5（1 2）：811- 812.
[5] 陈领朝，连秀峰.袁秉祥，等.脑络舒通胶囊对大鼠实验性脑及动静脉血栓形成的药效与研究[J].陕西中医.2002，23（4）376-377.
【关键词】血栓栓塞性疾病；药理学；通心络胶囊/制备工艺；小鼠/大鼠
【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）02-0162-02
血栓形成（thrombosis）是指在一定条件下，血液有形成分在血管内（多数为小血管）形成栓子，造成血管部分或完全堵塞，相应部位血液供应障碍的病理过程。依血栓组成成分可分为血小板血栓、红细胞血栓、纤维蛋白血栓、混合血栓等。按血管种类可分为动脉性血栓、静脉性血栓及毛细血管性血栓。血栓栓塞（thromboembolism）是血栓由形成部位脱落，在随血流移动的过程中部分或全部堵塞某些血管，引起相应组织和（或）器官缺血、缺氧、坏死（动脉血栓）及淤血、水肿（静脉血栓）的病理过程。近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，静脉血栓栓塞导致的死亡排在心脑血管疾病和恶性腫瘤之后的第三位，严重危害人类的健康。因此，寻求积极的预防及治疗方法尤为重要，本文通过做动物实验的方法，观察通心络胶囊治疗血栓栓塞性疾病的实验数据，进一步探讨其作用机理，为临床应用提供安全、有效的方法，报道如下：
1 制备工艺
1.1 药物组成：地龙9g，僵蚕9g，海风藤12g，续断12g，天南星（制）6g，水蛭9g，炮山甲9g，苏木12g。
1.2 制法：将以上中药按照配方配料，先行炮制、烘干、粉碎、过100目筛、混匀，取上述药粉装0号胶囊，使每粒胶囊装药粉0.4g即得。
1.3 制备工艺流程 炮制→配料→烘干→粉碎→过100目筛→混匀→装0号胶囊→检验→合格→入库
1.4 质量控制标准 【性状】本品为胶囊剂，其内容物为浅黄色粉末、味苦。【鉴别】（1）取本品内容物粉末2g，加石油醚（60—90℃）10ml，超声处理30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加石油醚（60—90℃）1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂对照药材l g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅酸G薄层板上，以石油醚（60—90℃）一乙酸乙酯一醋酸（10：3：0.1）为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
（2）取本品内容物粉末1 g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取仙灵脾对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸收上述二种溶液备5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯一乙醇一水（8：2：1）为展开剂，展开、取出、晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点或荧光斑点。（3）取本品内容物粉末lg加乙酸乙酯4ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄芪对照品，加甲醇制成每l ml含l mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各4ul，分别点于同一硅酸G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（20：4：0.5）为展开剂，展开、取出、晾十、喷以硫酸乙醇溶液（3→1 0），在80℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，显相同的橙红荧光班点。（4）取本品内容物粉末0.5g，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇1 5分钟，静置；吸取上清液，作为供试品溶液。另取益智仁对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维互钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯一甲酸一水一甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开、取出、晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】：本品应符合胶囊剂项下有关的各项规定（参照《中国药典》2005年版一部附录IL）【功能主治】：本品具有健脾益肾、清利湿热，解毒化瘀之功。主治急慢性肾炎等症。
2 实验材料
2.1 药品 通心络胶囊（处方组成：地龙9g，僵蚕9g，海风藤12g，续断12g，天南星（制）6g，水蛭9g，炮山甲9g，苏木12g。将以上中药按照配方配料，先行炮制、烘干、粉碎、过100目筛、混匀，取上述药粉装0号胶囊，使每粒胶囊装药粉0.4g即得。临用前用蒸馏水配成不同浓度备用。
2.2 阳性对照药 消栓通络片，批号：20080601。
2.3 试剂 戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，批号WS20080401；胶原蛋白，Sig ma，批号：9879；盐酸肾上腺素.批号：0809301；冰醋酸，批号：08083l；氢氧化钠，批号：2008228；活化部分凝血活酶（APTT）时间测定试剂盒，北京世堂帝科学仪器公司，批号：STG2020l-27；凝血活酶原（TT）时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：STGl010l-27；凝血酶（TT）时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号STG20802-19；血小板诱导剂（ADP），北京世帝科学仪器公司。 2.4 动物 二级昆明种小鼠，雄雌各半，体重1 8～22g；SD大鼠，雌雄各半，体重250～350g，均由第四军医大学实验动物研究中心提供，生产合格征号：scxk（军）宁第2002-005号。
3 方法和结果
3.1 通心络胶囊对凝血功能的影响 60只小鼠随机分为正常、阳性、消栓通0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，每组l 2只，每天给药1次，连续给药14d，于末次给药后lh，将小鼠尾尖1 cm处用利剪剪断，它即秒表开始计时，至血液凝固为止即为出血时间[1]。血液自动流出.用滤纸吸去第1滴血后，将血滴于清洁载玻片两端各1滴，立即秒表开始计时，用 6号干燥针头沿血滴边缘向里轻轻挑动血滴，至针头能挑起纤维蛋白丝为止.即为凝血时间。
结果（见表1）显示通心络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势（P<0.05或P<0.01）。
3.2 通心络胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率及凝血因子的影响 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、通心络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg六个剂量组，除正常对照组外，各组均造成血瘀模型。造模：参照文献[2]复制血瘀模型，但盐酸肾上腺素（Adr）的剂量及冰冻时间有所改变，具体操作如下：将1mg/mL的Adr用生理鹽水稀释1倍，第1d每隔4h皮下注射0.2mL稀释后的Adr，共给3次。在每2次给药的中间时间将大鼠放入0～2℃冰水中4min进行冷刺激；第2d仍按的日剂量给予2次Adr （间隔4h），在2次给药的中间时间将大鼠放入冰水中3min进行1次冷刺激，模型即造成。48h后大鼠1%戊巴比妥钠（40mg/kg）行腹腔麻醉，腹腔静脉取血，置于3.8枸橼酸钠抗凝管中。离心，测定血小板聚集率和凝血因子[3]。结果（见表2～3）与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；通心络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异（P<0.05或P<0.01）。
3.3 通心络胶囊对胶原蛋白肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成的影响 取小鼠60只，雌雄各半，随机分成正常组、阳性组、通心络胶囊0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，给药1 4d，各组于末次给药后1h，每只小鼠尾静脉注射胶原蛋白肾上腺素混合血栓诱导剂[4]，结果（见表4） 表明通心络胶囊0 .50g/kg、1.00g/kg给药1 4d与模型组比较，能明显增加小鼠存活率（P<0.05或P<0.01）。
4 讨论
近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，严重危害人类的健康。血小板的粘附、聚集、释放反应可导致血栓形成、动脉粥样硬化等心脑血管疾病[5]。因此活血化瘀、通经活络是其主要的治疗原则。通心络胶囊由地龙、海风藤、续断、炮山甲、僵蚕、天南星（制）、水蛭等组成，具有活血化瘀，温经通络，祛风定惊，散结止痛的功效，用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、言语迟涩、发音不清、口眼歪斜、肢体麻木，半身不遂及动脉硬化症。临床上取得了良好的疗效。对大鼠造成血瘀模型，发现与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短，血小板聚集率显著增高；通心络胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态，与模型组比较有明显差异（P<0. 05或P<0.01）。凝血时间实验结果显示，通心络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势（P<0. 05或P<0.01）。胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成结果，表明通心络胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与模型组比较，能明显增加小鼠存活率（P<0. 05或P<0.01）。表明通心络胶囊可以在活体中显示出抗血栓作用，本实验为通心络胶囊的临床疗效提供了药理学依据。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药政管理局中药新药研究指南（药学药理学毒理学）：[M].2004：172
[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2004：564-566
[3] 张强宗，刘俊田，史小莲，等.水蛭免加热提取物对高凝动物模型凝血系统及血小板聚集率的影响[J].中国实验方剂学杂志，2006。1 2（5）：47-49.
[4] 谢辉.许惠琴.李 虹.韭白向提取物对小鼠凝血时间及体内血栓形成的影响[J]时珍国医国药.2004.1 5（1 2）：811- 812.
[5] 陈领朝，连秀峰.袁秉祥，等.脑络舒通胶囊对大鼠实验性脑及动静脉血栓形成的药效与研究[J].陕西中医.2002，23（4）376-377.