【摘 要】
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为改良米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶11家族木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其Tyr13(Y13)置换为Phe(F)。基于AoXyn11A与同一家族7种耐热木聚糖酶一级结构的多序列同源比对及其
【机 构】
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江南大学生物工程学院; 江南大学食品学院; 江南大学无锡医学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31271811)
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为改良米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶11家族木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其Tyr13(Y13)置换为Phe(F)。基于AoXyn11A与同一家族7种耐热木聚糖酶一级结构的多序列同源比对及其三维结构的同源建模和分子动力学模拟,设计了一种突变酶AoXyn11AY13F;以重组质粒p PIC9K-Aoxyn11A为模板,采用PCR技术将AoXyn11A基因(Aoxyn11A)中编码Y13的密码子TAC突变为F的TTC,构建了一种突变酶基因(Aoxyn11AY13F);分别将Aoxyn11A和Aoxyn11AY13F在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实施了表达,并对重组表达产物AoXyn11A和AoXyn11AY13F的耐热性进行了分析。结果表明:突变酶的最适温度Topt由突变前的50℃提高到55℃;AoXyn11AY13F在50℃的半衰期t1/250为95 min,较AoXyn11A(t1/250=6 min)延长了约15倍。由此经Y13F定点突变显著改良了野生型木聚糖酶的耐热性。
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