【摘 要】
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目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7，HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染；应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活；实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响；蛋白质免疫印迹实验(western blot
【机 构】
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国家儿童医学中心 首都医科大学附属北京儿童医院 北京市儿科研究所 感染与病毒研究室 儿科重大疾病研究教育部重点实验室 儿童呼吸道感染性疾病研究北京重点实验室 中国医学科学院儿童危重感染诊治创新单元，北
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目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7，HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。
方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染；应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活；实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响；蛋白质免疫印迹实验(western blot，WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。
结果免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞，WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调，ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI＝0.5，P＝0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后，HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0025)；HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞，IL-1β的表达同样被显著抑制(P＝0.0191)。荧光定量PCR检测HAdV-7感染可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3 mRNA表达上调(NLRP3：P＝0.0004；pro-IL-1β：P＝0.0007)，同时WB显示HAdV-7可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3蛋白表达上调；使用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞，可抑制HAdV-7感染的细胞上清中IL-1β的表达(P＝0.0027); HAdV-7感染NLRP3缺陷的THP-1分化的巨噬细胞，IL-1β的表达被明显抑制(P＝0.0189)。分别使用TLR2、TLR4、TLR7/9信号传导抑制剂，抑制HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞，结果显示抑制TLR4信号传导，细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调(P＝0.0122)；使用ROS抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂，或抑制K＋外流，分别处理HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞，结果显示抑制组织蛋白酶B(P＝0.0292)，或抑制K＋外流时(KCl, P＝0.0022；Glibenclamide, P＝0.0275)，细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调。
结论HAdV-7感染THP-1细胞激活NLRP3炎症小体，NLRP3炎症小体激活的第一信号通过Toll样受体4(TLR4)信号传导，第二信号主要通过半通道模型介导K＋外流的和溶酶体破坏模型释放组织蛋白酶B的激活NLRP3炎症小体。
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