【摘 要】
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目的 探究脂肪干细胞(ADSCs)来源的外泌体对2型糖尿病肾病大鼠模型肾脏的作用以及机制.方法 以SD大鼠为实验对象,无菌条件下抽提大鼠腹股沟处脂肪组织,进行ADSCs的原代培养,
【机 构】
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青岛大学附属医院内分泌科,山东青岛266003
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目的 探究脂肪干细胞(ADSCs)来源的外泌体对2型糖尿病肾病大鼠模型肾脏的作用以及机制.方法 以SD大鼠为实验对象,无菌条件下抽提大鼠腹股沟处脂肪组织,进行ADSCs的原代培养,采用油红O染色和流式细胞仪方法对ADSCs进行鉴定.利用超速离心法进行收集外泌体,采用透射电子显微镜和Western blot法对外泌体进行鉴定.构建2型糖尿病肾病大鼠模型,根据实验目的分成3组,即空白对照组,糖尿病肾病组和外泌体治疗组.处理12周后无痛苦处死大鼠,无菌条件下摘取肾脏,利用HE染色和透射电镜法观察肾脏的形态,利用RT-PCR和Western blot法检测肾脏组织中凋亡相关蛋白Bcl-2,Bad和Bax的表达.结果 原代ADSCs细胞呈多角型,贴壁生长,油红O染色阳性,ADSCs细胞表面蛋白CD90和CD105的表达分别为86.7％和91.4％;CD31和CD45的表达分别为0.4％和1.2％.外泌体为直径50～ 150nm的双层膜囊泡状结构,外泌体的分子标志物CD81和CD63表达阳性.外泌体治疗组大鼠肾脏肾小球较为规则,系膜未见明显增生.大鼠肾脏组织抗凋亡因子Bcl-2的相对表达量对照组明显高于糖尿病肾病组,外泌体治疗组明显高于糖尿病肾病组.大鼠肾脏组织凋亡相关因子Bad和Bax的相对表达量对照组明显低于糖尿病肾病组,外泌体治疗组明显低于糖尿病肾病组.结论 ADSCs来源的外泌体通过抑制细胞凋亡和系膜组织增生起到保护肾功能的作用.
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