【摘 要】
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目的:探讨肺腺癌组织中DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)表达与SPG20甲基化水平,分析二者相关性及在肺腺癌发病机制中的临床意义.方法:收集2020年4月至2021年4月于承德医学院附属医院收集的70例肺腺癌和癌旁组织,采用焦磷酸测序检测SPG20基因甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SPG20和DNMT3b mRNA的表达,采用免疫组织化学法及Western blot检测SPG20和DNMT3b的蛋白表达.统计分析SPG20甲基化水平与DNMT3b相关性及两者与临床病例特征的相关
【机 构】
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承德医学院附属医院胸外科 河北省承德市 067000
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目的:探讨肺腺癌组织中DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)表达与SPG20甲基化水平,分析二者相关性及在肺腺癌发病机制中的临床意义.方法:收集2020年4月至2021年4月于承德医学院附属医院收集的70例肺腺癌和癌旁组织,采用焦磷酸测序检测SPG20基因甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SPG20和DNMT3b mRNA的表达,采用免疫组织化学法及Western blot检测SPG20和DNMT3b的蛋白表达.统计分析SPG20甲基化水平与DNMT3b相关性及两者与临床病例特征的相关性.构建DNMT3b下调si-RNA,采用脂质体介导法,将DNMT3b si-RNA、阴性对照si-RNA和空白对照组转染A549细胞.使用RT-qPCR和Wesrern blot检测DNMT3b mRNA和蛋白表达水平,采用焦磷酸测序检测各组SPG20基因甲基化水平.结果:在癌组织和癌旁组织中,SPG20基因甲基化率分别为76.25％±5.74％和13.45％±2.41％,SPG20 mRNA相对表达量为0.18±0.03和1.21±0.17,差异具有统计学意义(均P<0.05).DNMT3b mRNA相对表达量为1.62±0.27,高于癌旁组织的0.32±0.05;免疫组织化学检测结果显示SPG20蛋白表达阳性率分别为27.14％和72.86％,差异具有统计学意义(P<0.05);DNMT3b蛋白表达阳性率分别为75.71％和22.86％,差异具有统计学意义(P<0.05).Western blot检测结果显示DNMT3b在癌组织中表达为68.57％±3.18％,高于癌旁组织25.29％±1.35％;SPG20在癌组织中表达为16.87％±1.56％,低于癌旁组织的58.75％±2.68％,差异均具有统计学差异(均P<0.05).肺腺癌组织中SPG20甲基化和DNMT3b具有相关性(r=0.437,P<0.05);SPG20甲基化和DNMT3b与肿瘤TNM分期、组织分化和淋巴结转移密切相关(P<0.05).体外实验显示,RNA干扰后DNMT3b si-RNA组中DNMT3b mRNA表达量最低,SPG20基因甲基化率明显下降.结论:在肺腺癌病变过程中,DNMT3b与SPG20基因甲基化存在明显的相关性,DNMT3b高表达可能是SPG20基因甲基化前重要的分子事件,在肺腺癌早期病变诊治中具有潜在应用价值.
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