【摘 要】
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目的: 制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb).方法: 应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为
【机 构】
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扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009
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目的: 制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb).方法: 应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Western blot鉴定mAb的特异性.结果: 获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb 1G5、5E3的ELISA效价分别为1:1 600 000,1:120 000.在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应.在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带.结果表明,mAb 1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb.结论: 成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值.
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