【摘 要】
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目的：构建绿色荧光蛋白-串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体（His-EGFP-3xNLS），并在原核细胞中进行表达与纯化。方法：采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码
【机 构】
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南方医科大学病理生理学教研室、广东省蛋白质组学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.30700291)
论文部分内容阅读
目的：构建绿色荧光蛋白-串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体（His-EGFP-3xNLS），并在原核细胞中进行表达与纯化。方法：采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来，使用常规酶切和连接方法将其重组至pET-14b载体中，对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21（DE3）大肠杆菌株，用IPTG诱导融合蛋白表达，并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果：构建的His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体是正确的，该载体可在大肠杆菌内高效表达，
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