【摘 要】
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目的 获得纯度较高的WISP-l蛋白结构域,为进一步升发靶向WISP-1蛋白的药物奠定基础.方法 将编码WISP-l蛋白4个结构域的基因克隆到pFN19A蛋白表达载体中,4个重组质粒分别在大肠埃希菌中诱导表达对应的WISP-1蛋白结构域.用Halo树脂共价层析法纯化目的蛋白.结果 获得了4个重组质粒pFN19A Halo-IGFBP/VWFC/TSP/CTCK.并在KRX敏感菌株中诱导表达目的蛋白
【机 构】
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310013杭州,浙江省医学科学院分子医学中心,310002杭州市肿瘤医院放疗科,310013杭州,浙江省医学科学院分子医学中心,310013杭州,浙江省医学科学院分子医学中心,310002杭州市肿瘤
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目的 获得纯度较高的WISP-l蛋白结构域,为进一步升发靶向WISP-1蛋白的药物奠定基础.方法 将编码WISP-l蛋白4个结构域的基因克隆到pFN19A蛋白表达载体中,4个重组质粒分别在大肠埃希菌中诱导表达对应的WISP-1蛋白结构域.用Halo树脂共价层析法纯化目的蛋白.结果 获得了4个重组质粒pFN19A Halo-IGFBP/VWFC/TSP/CTCK.并在KRX敏感菌株中诱导表达目的蛋白,通过优化诱导条件获得4个高表达结构域蛋白.SDS-PAGE和Western印迹特异性条带鉴定纯化蛋白的质量大小与预期一致.经BCA蛋白浓度监测,E2中重组蛋白浓度可达到500～ 1500 mg/L.结论 通过Halo树脂共价层析法,获得了纯度较高的WISP-14个结构域蛋白,为研究WISP-1蛋白在肝癌等肿瘤发生发展过程中的关键功能结构域打下基础。
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