【摘 要】
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成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)具有促进细胞增殖,诱导新生血管形成等重要生理作用,与肿瘤的发生及发展也有十分密切的关系.P253R是Apert综合症中发现的
【机 构】
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暨南大学生物工程研究所,广州,510632;广东药学院生命科学与生物制药学院,广州,510006
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成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)具有促进细胞增殖,诱导新生血管形成等重要生理作用,与肿瘤的发生及发展也有十分密切的关系.P253R是Apert综合症中发现的一种突变,可使FGFR2Ⅲc与FGF2亲和力大大增加,从而导致过度自分泌和旁分泌活性,引起骨骼发育异常.从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到野生型FGFR2Ⅲc胞外段基因片段(wsFGFR2)；再利用重叠延伸法以wsFGFR2基因片段为模板扩增得到P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段基因片段(msFGFR2,P253R是Apert综合征中发现的一种突变,可使FGFR2与FGF2亲和力大大增加).msFGFR2基因克隆到pET3c载体,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中以包涵体的形式表达.经凝胶层析复性和肝素亲和层析纯化得到复性成功的活性蛋白,复性率为12％,纯度大于95％.MTF结果表明,msFGFR2能显著抑制FGF2促NIH3T3细胞增殖能力,并抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,提示msFGFR2能有效阻断FGFs的细胞内信号通路,具有很好的产业化和临床应用前景.
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