【摘 要】
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目的针对对虾中白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）,分别建立基于国外专利技术的重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）方法,基于国内专利技术的重组酶介导等温扩增（Recombinase-aided amplification,RAA）方法,并对两种检测方法进行比较。方法应用重组酶等温扩增技术在恒温
【基金项目】
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大连市科技创新基金项目（2022JJ13SN090）； 辽宁省“兴辽英才计划”项目（XLYC2002106）～～；
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目的针对对虾中白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）,分别建立基于国外专利技术的重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）方法,基于国内专利技术的重组酶介导等温扩增（Recombinase-aided amplification,RAA）方法,并对两种检测方法进行比较。方法应用重组酶等温扩增技术在恒温（39℃）条件下完成扩增反应,调整反应体系中模板DNA和探针浓度,优化WSSV病毒RPA和RAA两种方法的反应体系,建立了可靠稳定的等温扩增RPA和RAA快速检测方法,比较了两种方法的特异性、灵敏度、扩增效率和稳定性。结果所建立的荧光RPA和RAA方法在恒温39℃的条件下特异性检测WSSV,检测构建质粒DNA的灵敏度可达到1.0×10~6 copies/μL,检测实际感染阳性样品的灵敏度可达到1.31×101 pg/μL;RPA方法的扩增线性曲线拟合度r~2=0.9970,扩增效率为98.50%;RAA方法的扩增线性曲线拟合度r~2=0.9910,扩增效率为98.50%。结论所建立的基于重组酶等温扩增技术的RPA和RAA方法,特异性好,对于质粒和阳性样品检测灵敏度一致,扩增效率一致,具有很好稳定性,适用于水产品养殖及生产加工和通关口岸进口虾类产品中WSSV病毒的现场快速筛查防控。
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