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摘 要：本實验对丽江紫乌头中的二萜生物碱进行研究，利用反复硅胶柱层析、重结晶等分离手段，从中分离得到一种新型C-19二萜生物碱，利用溶剂缓慢挥发法得到单晶并对其进行结构解析，通过CCDC数据库查询为一新型晶体结构，CCDC： 2007957。
关键词：丽江紫乌头;新型C-19二萜生物碱;晶体结构
中图分类号：R284;Q949.746.5
文献标志码：A
丽江紫乌头Aconitum episcopale Levl.又名紫草乌，堵喇，系毛茛科乌头属植物，生长于海拔2 400～3 200 m的丛林或高山草地中，主要分布于四川西南部和云南西北部 [1]。在民间其块根常用来治疗风湿骨痛、跌打伤痛等病症。有文献报道，不同产地紫乌头中所含C-19二萜生物碱有着明显差异[2]。目前，对产地为丽江的紫乌头研究报道不多。本课题对丽江永胜产的紫乌头全草进行研究，从中分离得到多个C-19二萜生物碱，其中得到化合物120330A（26 mg），因其结构特殊故对其进行单晶结构解析。
1 实验部分[3]
1.1 仪器与材料
VG Auto spec-3000型质谱仪（英国 VG公司）;德国Bruker公司生产的Bruker AV300 MHz 超导核磁共振仪; Bruker-X射线单晶衍射仪;青岛海洋化工厂出产柱色谱硅胶;北京泰克公司生产的XT24显微熔点测定仪，TLC采用GF254高效硅胶板（北京泰克公司生产）。样品采自云南丽江永胜县，经云南大学生物系胡志浩教授鉴定为毛茛科植物丽江紫乌头（Aconitum episcopale Levl.），标本YS-2009-09-21存放于云南大学教育部自然资源与药物化学重点实验室。
1.2 提取与分离
将7.5 kg干燥的丽江永胜产紫乌头全草用95%乙醇进行多次浸泡，通过减压浓缩制得浸膏，用水将浸膏溶解，然后经过酸化，过滤，再进行碱化，接着用氯仿为萃取剂进行多次反复萃取，经减压浓缩除去溶剂后制得浸膏245 g。取该浸膏用硅胶柱色谱进行分离，溶剂体系采用石油醚和醋酸乙酯（含5%三乙胺）梯度洗脱（体积比30∶1），洗脱液合并后得7个部分，第7部分用石油醚和丙酮（含6%三乙胺）溶剂体系梯度洗脱（体积比7∶1～0∶1），采用硅胶柱色谱进行分离，得到化合物120330A（26 mg）。
2 结果与讨论
2.1 化合物120330A的核磁共振部分数据
化合物120330A：无色晶体（氯仿），m.p.134～136 ℃，1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ： 3.54（1H，s，OH），4.16（1H，t， J=4.8 Hz，H-14）， 3.36， 3.25， 3.20（各3H，s，OCH3））， 2.64和3.14（各1H，d，J=9.1 Hz，H-18）， C13NMR（CDCl3，75 MHz） δ：84.1 （C-1）， 27.8 （C-2）， 32.8 （C-3），38.7（C-4）， 46.0 （C-5）， 24.5 （C-6）， 45.8 （C-7）， 71.5（C-8）， 47.3 （C-9）， 45.8 （C-10）， 48.0 （C-11）， 27.8 （C-12）， 37.8 （C-13）， 76.6 （C-14）， 38.0 （C-15）， 82.8 （C-16）， 61.9 （C-17），78.4 （C-18）， 166.8 （C-19）， 50.5 （C-20）， 18.4 （C-21）， 55.9（1′-OCH3）， 56.5 （16′-OCH3）， 59.3 （18′-OCH3）。以上数据说明化合物120330A 为aconitane 型C-19二萜生物碱，与C-19二萜生物碱中的已知化合物塔拉萨敏数据相似[4]，不同之处在C-19处可能有碳基或CN双键存在。因此，初步认定其骨架为塔拉萨敏结构，但在其存在碳基或碳氮双键，如图1。
2.2 化合物120330A的晶体结构测定
为了对化合物结构及构型进行确定，利用溶剂缓慢挥发法培养单晶并测定单晶结构数据[5]。取少量化合物120330A，用氯仿溶解，室温下溶剂缓慢挥发并析出质量合乎要求的无色块状晶体。表1为化合物120330A的晶体结构数据，表2为其部分键长和键角数据。图2所示为化合物120330A的单晶结构，如图所示19个碳形成的环状结构，1个N-CH2CH3，3个-OCH3均与C19-二萜生物碱塔拉萨敏的结构完全一致，且从图上显示C19处与氧以双键相连，即有碳基存在。且根据单晶结构图显示两个羟基分别以14α，8β型进行连接，C-1上的甲氧基和C-16上的甲氧基也分别以1α，16β方式进行连接，此晶体结构进一步证实了化合物120330A的结构特征。
3 结论
对丽江永胜产紫乌头的全草进行研究，首次从该种植物中分离得到化合物120330A，通过对其进行波谱分析与单晶衍射数据分析，确定其结构为aconitane 型C-19二萜生物碱，在其19号位有一CO，在14和8号位有羟基，1。16，18号位有甲氧基，将其与文献[6]中化合物1的数据进行对比，确定其结构为14α，8β-dihydroxy-1α，16β，18-Trimethoxy -19-oxoaconitan[6]。化合物120330A首次从该种植物中分离得到，并通过CCDC数据库查询为一新型晶体结构，CCDC： 2007957。
致谢 感谢云南大学教育部自然资源与药物化学重点实验室李良教授团队对本实验的大力支持。
参考文献：
[1]中国植物志编辑委员会.中国植物志（第27卷）[M].北京：科学出版社，1979.
[2]安婧娴，刘芳，刘芳，等. 近年来乌头属植物二萜生物碱化学成分及其镇痛活性研究进展[J]. 中南药学， 2016， 14（5）： 521-525.
[3]李咏梅，龚元，姜艳萍，等. 紫乌头中二萜生物碱的研究 [J]. 中草药， 2013， 44（8）： 951-954.
[4]龚元，李咏梅，赵静峰，等.丽江紫乌头中的二萜生物碱[J]. 云南大学学报， 2012， 34（5）： 566-569.
[5]张丽娜，李遥，阮班锋，等.一种新型白藜芦醇查尔酮类衍生物的单晶结构及合成工艺研究[J]. 安徽化工，2019，45（2）：50-53.
[6]胡疆 ，吕涛 ，蔡建，等. 滇南乌头中C19二萜生物碱化学成分研究[J]. 中国中药杂志， 2019， 44（4）： 717-722.
（责任编辑：曾 晶）
Abstract：
The diterpenoid alkaloids of Aconitum episcopale Levl. were studied and a diterpenoid alkaloid were isolated by silica column chromatogramphy. The diterpenoid alkaloids of Aconitum episcopale Levl. was subjected to a slow solvent evaporation method to obtain a single crystal and its structure was analyzed. CCDC： 2007957.
Key words：
Aconitum episcopale Levl.; C-19 diterpenoid alkaloids; single crystal
关键词：丽江紫乌头;新型C-19二萜生物碱;晶体结构
中图分类号：R284;Q949.746.5
文献标志码：A
丽江紫乌头Aconitum episcopale Levl.又名紫草乌，堵喇，系毛茛科乌头属植物，生长于海拔2 400～3 200 m的丛林或高山草地中，主要分布于四川西南部和云南西北部 [1]。在民间其块根常用来治疗风湿骨痛、跌打伤痛等病症。有文献报道，不同产地紫乌头中所含C-19二萜生物碱有着明显差异[2]。目前，对产地为丽江的紫乌头研究报道不多。本课题对丽江永胜产的紫乌头全草进行研究，从中分离得到多个C-19二萜生物碱，其中得到化合物120330A（26 mg），因其结构特殊故对其进行单晶结构解析。
1 实验部分[3]
1.1 仪器与材料
VG Auto spec-3000型质谱仪（英国 VG公司）;德国Bruker公司生产的Bruker AV300 MHz 超导核磁共振仪; Bruker-X射线单晶衍射仪;青岛海洋化工厂出产柱色谱硅胶;北京泰克公司生产的XT24显微熔点测定仪，TLC采用GF254高效硅胶板（北京泰克公司生产）。样品采自云南丽江永胜县，经云南大学生物系胡志浩教授鉴定为毛茛科植物丽江紫乌头（Aconitum episcopale Levl.），标本YS-2009-09-21存放于云南大学教育部自然资源与药物化学重点实验室。
1.2 提取与分离
将7.5 kg干燥的丽江永胜产紫乌头全草用95%乙醇进行多次浸泡，通过减压浓缩制得浸膏，用水将浸膏溶解，然后经过酸化，过滤，再进行碱化，接着用氯仿为萃取剂进行多次反复萃取，经减压浓缩除去溶剂后制得浸膏245 g。取该浸膏用硅胶柱色谱进行分离，溶剂体系采用石油醚和醋酸乙酯（含5%三乙胺）梯度洗脱（体积比30∶1），洗脱液合并后得7个部分，第7部分用石油醚和丙酮（含6%三乙胺）溶剂体系梯度洗脱（体积比7∶1～0∶1），采用硅胶柱色谱进行分离，得到化合物120330A（26 mg）。
2 结果与讨论
2.1 化合物120330A的核磁共振部分数据
化合物120330A：无色晶体（氯仿），m.p.134～136 ℃，1H-NMR（300 MHz，CDCl3）δ： 3.54（1H，s，OH），4.16（1H，t， J=4.8 Hz，H-14）， 3.36， 3.25， 3.20（各3H，s，OCH3））， 2.64和3.14（各1H，d，J=9.1 Hz，H-18）， C13NMR（CDCl3，75 MHz） δ：84.1 （C-1）， 27.8 （C-2）， 32.8 （C-3），38.7（C-4）， 46.0 （C-5）， 24.5 （C-6）， 45.8 （C-7）， 71.5（C-8）， 47.3 （C-9）， 45.8 （C-10）， 48.0 （C-11）， 27.8 （C-12）， 37.8 （C-13）， 76.6 （C-14）， 38.0 （C-15）， 82.8 （C-16）， 61.9 （C-17），78.4 （C-18）， 166.8 （C-19）， 50.5 （C-20）， 18.4 （C-21）， 55.9（1′-OCH3）， 56.5 （16′-OCH3）， 59.3 （18′-OCH3）。以上数据说明化合物120330A 为aconitane 型C-19二萜生物碱，与C-19二萜生物碱中的已知化合物塔拉萨敏数据相似[4]，不同之处在C-19处可能有碳基或CN双键存在。因此，初步认定其骨架为塔拉萨敏结构，但在其存在碳基或碳氮双键，如图1。
2.2 化合物120330A的晶体结构测定
为了对化合物结构及构型进行确定，利用溶剂缓慢挥发法培养单晶并测定单晶结构数据[5]。取少量化合物120330A，用氯仿溶解，室温下溶剂缓慢挥发并析出质量合乎要求的无色块状晶体。表1为化合物120330A的晶体结构数据，表2为其部分键长和键角数据。图2所示为化合物120330A的单晶结构，如图所示19个碳形成的环状结构，1个N-CH2CH3，3个-OCH3均与C19-二萜生物碱塔拉萨敏的结构完全一致，且从图上显示C19处与氧以双键相连，即有碳基存在。且根据单晶结构图显示两个羟基分别以14α，8β型进行连接，C-1上的甲氧基和C-16上的甲氧基也分别以1α，16β方式进行连接，此晶体结构进一步证实了化合物120330A的结构特征。
3 结论
对丽江永胜产紫乌头的全草进行研究，首次从该种植物中分离得到化合物120330A，通过对其进行波谱分析与单晶衍射数据分析，确定其结构为aconitane 型C-19二萜生物碱，在其19号位有一CO，在14和8号位有羟基，1。16，18号位有甲氧基，将其与文献[6]中化合物1的数据进行对比，确定其结构为14α，8β-dihydroxy-1α，16β，18-Trimethoxy -19-oxoaconitan[6]。化合物120330A首次从该种植物中分离得到，并通过CCDC数据库查询为一新型晶体结构，CCDC： 2007957。
致谢 感谢云南大学教育部自然资源与药物化学重点实验室李良教授团队对本实验的大力支持。
参考文献：
[1]中国植物志编辑委员会.中国植物志（第27卷）[M].北京：科学出版社，1979.
[2]安婧娴，刘芳，刘芳，等. 近年来乌头属植物二萜生物碱化学成分及其镇痛活性研究进展[J]. 中南药学， 2016， 14（5）： 521-525.
[3]李咏梅，龚元，姜艳萍，等. 紫乌头中二萜生物碱的研究 [J]. 中草药， 2013， 44（8）： 951-954.
[4]龚元，李咏梅，赵静峰，等.丽江紫乌头中的二萜生物碱[J]. 云南大学学报， 2012， 34（5）： 566-569.
[5]张丽娜，李遥，阮班锋，等.一种新型白藜芦醇查尔酮类衍生物的单晶结构及合成工艺研究[J]. 安徽化工，2019，45（2）：50-53.
[6]胡疆 ，吕涛 ，蔡建，等. 滇南乌头中C19二萜生物碱化学成分研究[J]. 中国中药杂志， 2019， 44（4）： 717-722.
（责任编辑：曾 晶）
Abstract：
The diterpenoid alkaloids of Aconitum episcopale Levl. were studied and a diterpenoid alkaloid were isolated by silica column chromatogramphy. The diterpenoid alkaloids of Aconitum episcopale Levl. was subjected to a slow solvent evaporation method to obtain a single crystal and its structure was analyzed. CCDC： 2007957.
Key words：
Aconitum episcopale Levl.; C-19 diterpenoid alkaloids; single crystal