【摘 要】
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目的:探讨左归降糖解郁方调控Glu-mGluR2/3-PI3K信号通路在糖尿病并发抑郁症(DD)海马神经血管单元(NVU)中神经元凋亡的保护作用及其机制.方法:原代分离、纯化和培养SD大鼠海
【机 构】
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湖南中医药大学第一附属医院,长沙410007;湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地,长沙410208;湖南中医药大学科技创新中心,长沙410208;湖南省中药粉体与创新药物省部共建国
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目的:探讨左归降糖解郁方调控Glu-mGluR2/3-PI3K信号通路在糖尿病并发抑郁症(DD)海马神经血管单元(NVU)中神经元凋亡的保护作用及其机制.方法:原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)与脑微血管内皮细胞(Bm),并对其进行免疫细胞化学染色鉴定;采用Transwell小室及高糖联合皮质酮干预构建DD海马NVU细胞模型;实验设正常对照组、模型对照组、10％空白血清对照组、mGluR2/3激动剂5μmol/L组、PI3K阻断剂2μmol/L组、左归降糖解郁方32.8 g/kg 10％含药血清组.造模及给药18h后,采用CCK8法检测NVU中海马神经元细胞存活力,采用ELISA法检测NVU中海马神经元细胞上清液谷氨酸(Glu)含量;采用免疫荧光联合高内涵细胞成像(HCA)分别检测NVU中AS细胞内代谢型谷氨酸受体2/3(mGluR2/3)蛋白表达水平和海马神经元细胞内的细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、半胱天冬酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平;采用Tunel染色NVU中海马神经元细胞凋亡水平.结果:与正常对照组比较,模型对照组海马神经元细胞存活率显著降低(P＜0.01),细胞上清液中Glu含量显著升高(P＜0.01),AS细胞内mGluR2/3蛋白表达显著上调(P＜0.01),Ne细胞内ERK、Casepase-9蛋白表达明显上调、PI3K蛋白表达明显下调(P＜0.05或P＜0.01),海马神经元细胞凋亡显著增加(P＜0.01);与模型对照组比较,左归降糖解郁方32.8 g/kg 10％含药血清组海马神经元细胞存活力显著增加(P＜0.05),Glu含量显著降低(P＜0.05),mGluR2/3、ERK、Casepase-9蛋白表达显著下调,PI3K蛋白表达明显上调(P＜0.05或P＜0.01),海马神经元细胞凋亡数量显著下降,且核固缩、染色质浓染等阳性特征明显减轻.结论:左归降糖解郁方可调控mGluRv3活化介导的Glu-mGluRv3-PI3K信号通路异常,这可能是其抑制糖尿病并发抑郁症海马神经元凋亡的重要机制.
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