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摘 要：胶体金，主要是由氯金酸在还原剂如柠檬酸三钠、抗坏血酸、柠檬酸钠、鞣酸等来共同组成的的一定大小的金颗粒，在静电的作用下可以形成稳定的胶体状态。在胶体金当中，可以用肉眼进行可见红色的观察，因此在抗原与抗体结合部位的金颗粒达到一定数量时，便可观察到红色条带，通过红色条带即可判断检测结果。在本文当中，首先对免疫层析的类型进行分类；其次对胶体金免疫层析技术进行了分析；最后讲述了胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用。
关键词：胶体金免疫层析；食品检测；应用
中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1004-7344（2018）14-0323-02
在现阶段当中，食品安全问题已经成为了人们关注的主要问题之一，对于人类的健康会产生相当大的影响，在不法分子的利益驱使下，在食品当中添加了很多的违禁药物。因此需要对食品当中的所存在的违禁物品进行检测，在对食品检测的过程当中，需要对感官、理化、细菌以及毒剂等多种指标进行充分的检测，从而来对食品进行定性和半定性的测量。因此在这个过程当中，就需要利用胶体金免疫层次技术来进行免疫学的检测，在操作方面比较简单，灵敏度也相对较高，并且在成本方面也是相对廉价的，因此被广泛应用在食品快速检测的过程当中。
1 免疫层析类型
在免疫层析当中需要对抗原与抗体结合的方式进行分析，其中主要可以分为两种类型，分别为非竞争性免疫层析和竞争性的免疫层析技术。
在非竞争性的免疫层析方面，也可以被称之为双抗体夹心法。在实践的过程当中，主要对着色的标记物体和待测抗原本身的特异性抗体做出相连接，从而对其在结合区域当中的沉积物进行分析。对于样品所含有的物质，在毛细管的作用下，会迅速的渗透到结合区域当中，在标记物体当中形成的溶剂现象由于没有收到材料本身的吸水涨力的牵引作用没有显示。样品的溶液会随着膜条向前逐渐的移动。如果样品当中存在着待测抗原的话，在和标记物结合的情况下，会进行抗体的捕捉，最终形成结合物体。利用此种方式进行检测，一般都会用于多个抗原位点的检测，也就是致病细菌以及大分子蛋白质等方面的检测。
在竞争性的免疫层析方面，主要是对着色标物体与待测抗原的特异性抗体作出连接，从而使其在结合区域内沉积。在样品当中如果含有待测抗原的话，对于样品本身当中的抗原和标记物就会形成复合物的现象。在利用固相化检测的过程当中，需要对其进行待测抗原或者其他类似物体的检测。在这个过程当中，会存在其他物质的竞争，不再发生反应，在检测线的位置处不会显示颜色差异。在对样品前移的过程当中，会产生结合的现象，最终形成复合物使得质控线显色。此检测方法，主要可以用来检测单一抗原表位的小分子抗原，一般可用来对农药残留以及违禁药品的检测。
2 胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析检测技术，主要是氯金酸（chloroauricacid）的水溶液，氯金酸在还原剂如白磷、柠檬酸三钠等，在聚合作用下所形成的特定大小的金颗粒。在静电作用下可以形成一种稳定的胶体溶液。在胶体金颗粒当中的高电子密度是相对较大的，在颗粒聚集达到一定浓度的时候，就可以进行粉红色斑点的显示，因此在此种特性下可以利用其作为免疫层析的检测试验。
在胶体金进行制作的过程中，需要利用还原法剂来对氯金酸进行还原制备，其中现阶段经常用到的还原剂有：白磷、乙醇、过氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、柠檬酸三钠、鞣酸等，一般来说都会用到柠檬酸三钠还原法来进行还原。通过此种方式下制备出的胶体金颗粒的直径相对较大。胶体金进行蛋白制备，主要是对蛋白质等多种大分子物质在进行电解过程，从吸附到包裹的过程[1]。其中需要保持在较小浓度的蛋白离子，在标记之前需要利用双蒸水透析以除去多余的离子。对于制备好的胶体金-蛋白质复合物需要做出进一步的纯化，从而可以实现对集合物体当中的蛋白或者胶体金颗粒进行去除，在去除的过程当中一般会采用超速离心法和凝胶过滤法。
3 胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用
胶体金免疫层析技术在实际的应用当中，是相当广泛的，在食品检测领域当中属于近些年才发展起来的技术。在本文当中，主要可以分为以下几个方面来进行分析：
（1）在食品控制领域当中，食品中的致病菌含量一旦超标，就很可能导致食用者生病。目前，食源性致病菌的检测仍是按照细菌分离、培养及生化鉴定的方法进行检测。这种方法耗时长、操作繁琐、环境和主观因素影响较大，从而给食品检测带来较多不便。而使用胶体金免疫层析技术，则能够解决该方面检测的操作复杂、灵敏度低和特异性低的问题。例如，在大肠杆菌检测方面，进行胶体金结合垫的制备只需要进行2次离心就可以消除标记过程中多余抗体。相较于其他方法，胶体金免疫层析技术明显能够提高结合垫的性能和检验灵敏度。
（2）在食品安全检测的领域当中，一些不法的商人為了行业竞争会采取不正当的手段，在食品当中进行违禁物品的添加，给食品安全问题带来了相当大的隐患和威胁。利用胶体金免疫层析技术来进行检测，可以操作简单、检测时间短、便于现场操作，可以为现场执法带来科学依据。在对有害微生物的检测过程当中，一般都会对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、布氏杆菌、霍乱弧菌等各种细菌来做出检测和分析，其中胶体金标记的EHECO157单抗作为一抗包被于结合垫，EHECO157抗血清作为二抗固相化于硝酸纤维素膜的检测带上，在质控带上会形成固相化的免疫球蛋白。在利用此种方式及逆行检测时间大约是在15min的左右，对于大肠杆菌O157的最低检出浓度为0.1cfu/mL[2]。
（3）在使用胶体金对食品当中的农药、兽药等药物残留物质进行检测的过程当中，由于农药、兽药等药物残留物质一般都为小分子的物质，属于半抗原，在进行制备抗体的过程当中需要将其和大分子蛋白进行连接，从而制备人工抗原。其中的磺胺甲噁唑（sulfamethoxazole，sinomin，SMZ，又名新诺明）作为兽医临床上常用的磺胺类药物，可以对动物的全身感染进行良好的应用，在对动物性的食品检测当中可以进行超细菌耐药性的提升，在长期使用的情况下可以使得该药物残留食品的消费者患皮炎、白细胞减少、溶血性贫血等疾病。采用SMZ-HSA（磺胺甲噁唑-人血清白蛋白）免疫新西兰白兔制得抗体，并用胶体金进行标记，将其包被于结合垫上。将SMZOVA（磺胺甲噁唑-卵清白蛋白）固相化在检测带上，试纸条无质控带。样品中的SMZ与SMZ-OVA竞争结合抗体，由于试纸条只有检测带，所以每次检测必须设阴性对照试纸条，检测时阴性呈现出红色条带，而阳性无红色条带。该方法对SMZ标准溶液的灵敏度达到50ng/mL，整个检测反应在5～10min内完成。在对食品当中的违禁药物做出检测的过程当中，一般都会对食物当中所含有的类似于农药残留物质进行检测，其中可以利用竞争免疫层析的方式进行检测，最小检测质量为45μg/mL。
（4）在非食品添加成分检测方面，胶体金免疫层析技术也得到运用。例如，在三聚氰胺这种化工物质的检测上，使用胶体免疫层析技术可以对乳制品中的三聚氰胺进行定性和定量检测，试纸条具有较好的稳定性、重复性和灵敏度。在苏丹红I的检测上可以使用利用胶体金免疫层析技术制作成的苏丹红I测试纸条，然后使用金标抗原方法将抗体固定在NC膜上就可以对食品中的苏丹红I进行定量检测[3]。
（5）食品中如果含有霉菌毒素等物质，易导致人体和动物产生病理变化，继而给人类健康带来严重危害。使用胶体金免疫层析技术，能够有效鉴定黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和葡萄球菌肠毒素等多种霉菌毒素。例如，在检测黄曲霉毒素B1时，使用胶体金免疫层析试纸法进行检测，可以与高效液相色谱法达到90.5%的相符率。同时，使用该方法能够实现现场快速检测[4]，并且可以用于粮食中的黄曲霉毒素B1的初筛。此外，使用该技术还能鉴定巧克力奶、婴儿奶粉和鲜牛奶等物质中的葡萄球菌肠毒素，毒素最低检出限为10mg/L。
4 结 语
综上所述，随着现在科学技术的不断发展，胶体金免疫层析技术已经在食品检测领域当中有相当广泛的应用，在检测方面的效果相对较好，并且操作简单快速，因此在很大程度上提高了其食品检测应用频率。在实际的应用过程当中，需要实现对最大限度的提升食品检测的敏感程度和特异性，增强其食品检测的快捷程度，最终为食品检测工作提供出更加便利的条件。
参考文献
[1]曹德康，苏建忠，张 瑛，等.胶体金免疫层析技术在食品安全检测中的应用研究进展[J].解放军预防医学杂志，2017（10）：1322～1325.
[2]任勃儒，谢 飞，王庭欣.免疫层析技术在食品违禁成分检测中的应用[J].食品研究与开发，2016（8）：194～197.
[3]张道宏，李培武，张 奇，等.污染粮油食品的主要真菌毒素及胶体金免疫层析技术在快速检测中的应用[J].中国油料作物学报，2010（4）：577～582.
[4]何 丽，杨莉婷，吴 琼.芯片技术和胶体金免疫层析技术在食品安全检测中的应用[J].生物学通报，2017（2）：1～4.
收稿日期：2018-4-14
关键词：胶体金免疫层析；食品检测；应用
中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1004-7344（2018）14-0323-02
在现阶段当中，食品安全问题已经成为了人们关注的主要问题之一，对于人类的健康会产生相当大的影响，在不法分子的利益驱使下，在食品当中添加了很多的违禁药物。因此需要对食品当中的所存在的违禁物品进行检测，在对食品检测的过程当中，需要对感官、理化、细菌以及毒剂等多种指标进行充分的检测，从而来对食品进行定性和半定性的测量。因此在这个过程当中，就需要利用胶体金免疫层次技术来进行免疫学的检测，在操作方面比较简单，灵敏度也相对较高，并且在成本方面也是相对廉价的，因此被广泛应用在食品快速检测的过程当中。
1 免疫层析类型
在免疫层析当中需要对抗原与抗体结合的方式进行分析，其中主要可以分为两种类型，分别为非竞争性免疫层析和竞争性的免疫层析技术。
在非竞争性的免疫层析方面，也可以被称之为双抗体夹心法。在实践的过程当中，主要对着色的标记物体和待测抗原本身的特异性抗体做出相连接，从而对其在结合区域当中的沉积物进行分析。对于样品所含有的物质，在毛细管的作用下，会迅速的渗透到结合区域当中，在标记物体当中形成的溶剂现象由于没有收到材料本身的吸水涨力的牵引作用没有显示。样品的溶液会随着膜条向前逐渐的移动。如果样品当中存在着待测抗原的话，在和标记物结合的情况下，会进行抗体的捕捉，最终形成结合物体。利用此种方式进行检测，一般都会用于多个抗原位点的检测，也就是致病细菌以及大分子蛋白质等方面的检测。
在竞争性的免疫层析方面，主要是对着色标物体与待测抗原的特异性抗体作出连接，从而使其在结合区域内沉积。在样品当中如果含有待测抗原的话，对于样品本身当中的抗原和标记物就会形成复合物的现象。在利用固相化检测的过程当中，需要对其进行待测抗原或者其他类似物体的检测。在这个过程当中，会存在其他物质的竞争，不再发生反应，在检测线的位置处不会显示颜色差异。在对样品前移的过程当中，会产生结合的现象，最终形成复合物使得质控线显色。此检测方法，主要可以用来检测单一抗原表位的小分子抗原，一般可用来对农药残留以及违禁药品的检测。
2 胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析检测技术，主要是氯金酸（chloroauricacid）的水溶液，氯金酸在还原剂如白磷、柠檬酸三钠等，在聚合作用下所形成的特定大小的金颗粒。在静电作用下可以形成一种稳定的胶体溶液。在胶体金颗粒当中的高电子密度是相对较大的，在颗粒聚集达到一定浓度的时候，就可以进行粉红色斑点的显示，因此在此种特性下可以利用其作为免疫层析的检测试验。
在胶体金进行制作的过程中，需要利用还原法剂来对氯金酸进行还原制备，其中现阶段经常用到的还原剂有：白磷、乙醇、过氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、柠檬酸三钠、鞣酸等，一般来说都会用到柠檬酸三钠还原法来进行还原。通过此种方式下制备出的胶体金颗粒的直径相对较大。胶体金进行蛋白制备，主要是对蛋白质等多种大分子物质在进行电解过程，从吸附到包裹的过程[1]。其中需要保持在较小浓度的蛋白离子，在标记之前需要利用双蒸水透析以除去多余的离子。对于制备好的胶体金-蛋白质复合物需要做出进一步的纯化，从而可以实现对集合物体当中的蛋白或者胶体金颗粒进行去除，在去除的过程当中一般会采用超速离心法和凝胶过滤法。
3 胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用
胶体金免疫层析技术在实际的应用当中，是相当广泛的，在食品检测领域当中属于近些年才发展起来的技术。在本文当中，主要可以分为以下几个方面来进行分析：
（1）在食品控制领域当中，食品中的致病菌含量一旦超标，就很可能导致食用者生病。目前，食源性致病菌的检测仍是按照细菌分离、培养及生化鉴定的方法进行检测。这种方法耗时长、操作繁琐、环境和主观因素影响较大，从而给食品检测带来较多不便。而使用胶体金免疫层析技术，则能够解决该方面检测的操作复杂、灵敏度低和特异性低的问题。例如，在大肠杆菌检测方面，进行胶体金结合垫的制备只需要进行2次离心就可以消除标记过程中多余抗体。相较于其他方法，胶体金免疫层析技术明显能够提高结合垫的性能和检验灵敏度。
（2）在食品安全检测的领域当中，一些不法的商人為了行业竞争会采取不正当的手段，在食品当中进行违禁物品的添加，给食品安全问题带来了相当大的隐患和威胁。利用胶体金免疫层析技术来进行检测，可以操作简单、检测时间短、便于现场操作，可以为现场执法带来科学依据。在对有害微生物的检测过程当中，一般都会对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、布氏杆菌、霍乱弧菌等各种细菌来做出检测和分析，其中胶体金标记的EHECO157单抗作为一抗包被于结合垫，EHECO157抗血清作为二抗固相化于硝酸纤维素膜的检测带上，在质控带上会形成固相化的免疫球蛋白。在利用此种方式及逆行检测时间大约是在15min的左右，对于大肠杆菌O157的最低检出浓度为0.1cfu/mL[2]。
（3）在使用胶体金对食品当中的农药、兽药等药物残留物质进行检测的过程当中，由于农药、兽药等药物残留物质一般都为小分子的物质，属于半抗原，在进行制备抗体的过程当中需要将其和大分子蛋白进行连接，从而制备人工抗原。其中的磺胺甲噁唑（sulfamethoxazole，sinomin，SMZ，又名新诺明）作为兽医临床上常用的磺胺类药物，可以对动物的全身感染进行良好的应用，在对动物性的食品检测当中可以进行超细菌耐药性的提升，在长期使用的情况下可以使得该药物残留食品的消费者患皮炎、白细胞减少、溶血性贫血等疾病。采用SMZ-HSA（磺胺甲噁唑-人血清白蛋白）免疫新西兰白兔制得抗体，并用胶体金进行标记，将其包被于结合垫上。将SMZOVA（磺胺甲噁唑-卵清白蛋白）固相化在检测带上，试纸条无质控带。样品中的SMZ与SMZ-OVA竞争结合抗体，由于试纸条只有检测带，所以每次检测必须设阴性对照试纸条，检测时阴性呈现出红色条带，而阳性无红色条带。该方法对SMZ标准溶液的灵敏度达到50ng/mL，整个检测反应在5～10min内完成。在对食品当中的违禁药物做出检测的过程当中，一般都会对食物当中所含有的类似于农药残留物质进行检测，其中可以利用竞争免疫层析的方式进行检测，最小检测质量为45μg/mL。
（4）在非食品添加成分检测方面，胶体金免疫层析技术也得到运用。例如，在三聚氰胺这种化工物质的检测上，使用胶体免疫层析技术可以对乳制品中的三聚氰胺进行定性和定量检测，试纸条具有较好的稳定性、重复性和灵敏度。在苏丹红I的检测上可以使用利用胶体金免疫层析技术制作成的苏丹红I测试纸条，然后使用金标抗原方法将抗体固定在NC膜上就可以对食品中的苏丹红I进行定量检测[3]。
（5）食品中如果含有霉菌毒素等物质，易导致人体和动物产生病理变化，继而给人类健康带来严重危害。使用胶体金免疫层析技术，能够有效鉴定黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和葡萄球菌肠毒素等多种霉菌毒素。例如，在检测黄曲霉毒素B1时，使用胶体金免疫层析试纸法进行检测，可以与高效液相色谱法达到90.5%的相符率。同时，使用该方法能够实现现场快速检测[4]，并且可以用于粮食中的黄曲霉毒素B1的初筛。此外，使用该技术还能鉴定巧克力奶、婴儿奶粉和鲜牛奶等物质中的葡萄球菌肠毒素，毒素最低检出限为10mg/L。
4 结 语
综上所述，随着现在科学技术的不断发展，胶体金免疫层析技术已经在食品检测领域当中有相当广泛的应用，在检测方面的效果相对较好，并且操作简单快速，因此在很大程度上提高了其食品检测应用频率。在实际的应用过程当中，需要实现对最大限度的提升食品检测的敏感程度和特异性，增强其食品检测的快捷程度，最终为食品检测工作提供出更加便利的条件。
参考文献
[1]曹德康，苏建忠，张 瑛，等.胶体金免疫层析技术在食品安全检测中的应用研究进展[J].解放军预防医学杂志，2017（10）：1322～1325.
[2]任勃儒，谢 飞，王庭欣.免疫层析技术在食品违禁成分检测中的应用[J].食品研究与开发，2016（8）：194～197.
[3]张道宏，李培武，张 奇，等.污染粮油食品的主要真菌毒素及胶体金免疫层析技术在快速检测中的应用[J].中国油料作物学报，2010（4）：577～582.
[4]何 丽，杨莉婷，吴 琼.芯片技术和胶体金免疫层析技术在食品安全检测中的应用[J].生物学通报，2017（2）：1～4.
收稿日期：2018-4-14