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科研课题 福建省卫生厅青年科研基金资助(编号2001-1-19)
摘 要 目的：研究高脂血症与外周血血小板白细胞聚集体的关系。方法：运用流式细胞术检测4组样本，即对照组、高脂血症1组(HDL-C≥0.9mmol/L)、高脂血症2组(HDL-C<0.9mmol/L)、心脑血管病变组中血小板白细胞聚集体、血小板中性粒细胞聚集体和血小板单核细胞聚集体的百分比。结果：高脂血症组和高脂血症1组与对照组比较，PLA和PNA的比例差异无显著性，PMA的比例高于对照组(P<0.05)；高脂血症2组和心脑血管病变组与对照组比较，PLA、PNA和PMA均高于对照组(P<0.05)，且高脂血症2组PLA和PNA均高与高脂血症1组。结论：PLA是监测高脂血症引起动脉粥样硬化和血栓的敏感指标，测定白细胞亚群与血小板的聚集体比测定血小板与总白细胞聚集体更有意义。
关键词 流式细胞术 高脂血症 血小板白细胞聚集体
材料与方法
研究对象：高脂血症组选择2007年3～11月高脂血症患者41例，男29例，女12例，年龄31～72岁，平均47岁。入选标准参照1997年我国制订的血脂异常防治建议，血清总胆固醇(TC)>5.20mmol/L和(或)甘油三酯(TG)≥1.70mmol/L，排除肝肾疾病、炎症以及继发性高脂血症。根据高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度分为两组：高脂血症1组(HDL-C≥0.9mmol/L)和高脂血症2组(HDL-C<0.9mmol/L)。心脑血管病变组25例，男16例，女9例，年龄37～56岁，平均44岁。对照组选用健康体检者20例，其中男10例，女10例，年龄20～46岁，平均34岁。
检测仪器及试剂：单克隆抗体CD45-PC5，CD41-PE；EPICS XL型流式细胞仪。
样本采集及处理：采血(柠檬酸钠抗凝)后，立即将1ml全血加入1ml 4%多聚甲醛固定液中，4℃固定1小时，Tyrode氏缓冲液(NaCl 137.5mmol/L，MgCl2 2mmol/L，KCl 2.6mmol/L，葡萄糖5.5mmol/L，NaHCO3 12mmol/L，0.1%BSA，pH7.4)洗涤，1500g离心15分钟，共3次。取洗涤后的样本10μl，加入检测抗体各10μl，室温避光孵育20分钟，用Tyrode氏缓冲液稀释成1ml，上机检测。
流式细胞仪分析：使用CD45-PC5/SSC设备，将外周血白细胞分为中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞3个细胞群，用淋巴细胞群调整CD41表达在0.5%～1.5%，分别记录血小板白细胞聚集体(PLA)、血小板中性粒细胞聚集体(PNA)和血小板单核细胞聚集体(PMA)的百分比。
结果分析：流式细胞仪采集后的数据用软件SYSTEMTM Ⅱ SOFTWARE和WinMDI2.8分析。
统计学处理：采用SPSS10.0统计软件分析，两两比较用t检验。
结 果
见表1。高脂血症组和高脂血症1组与对照组比较，PLA和PNA的比例差异无显著性，PMA的比例高于对照组(P<0.05)；高脂血症2组和心脑血管病变组与对照组比较，PLA、PNA和PMA均高于对照组(P<0.05)，且高脂血症2组PLA和PNA均高与高脂血症1组。
讨 论
动脉粥样硬化性血栓形成的时候，血小板和白细胞被激活后分泌的趋化因子和细胞因子除可促进血小板和白细胞自身聚集外，还可促进血小板与白细胞结合，本资料结果与Habazettl等报道一致。
本研究提示HDL-C与AS发病呈负相关，当血浆HDL-C<0.9mmol/L时心脑血管疾病发生动脉粥样硬化和血栓的危险性显著增加，与赵氏[1]等报道一致。此外，本研究还提示血小板与白细胞的结合先始于血小板与单核细胞的结合，然后再进一步与中性粒细胞结合，其中的机制可能是，血脂紊乱会损伤内皮功能，尤其氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)可作用于内皮细胞，通过减少内皮一氧化氮(EDNO)合成或释放，抵制内皮细胞受体信号传导或内膜上EDNO的分解，引起内皮细胞释放氧自由基引起的氧化。损伤的内皮一方面通过内皮下暴露的胶原激活血小板，另一方面通过上调其表面ICAM-1、E-选择素、P-选择素等表达募集单核细胞，后者又可激活内皮细胞而诱导其上的粘附分子表达以使更多的单核细胞浸润，形成血小板和单核细胞的聚集体，聚集体的形成明显的加强了血小板与白细胞之间的相互作用[2]，进一步形成血小板和中性粒细胞聚集体。
综上所述，PLA是监测高脂血症引起动脉粥样硬化和血栓的敏感指标，测定白细胞亚群与血小板的聚集体比测定血小板与总白细胞聚集体更有意义，但很多因素，如温度，餐后血脂、检测仪器和血样的保存时间对PLA的形成均有明显影响，从而可能导致研究结果之间出现较大差异，因此，还需要用统一的标准和大样本临床试验解决上述问题。
参考文献
1 赵玫，白小娟，等.血脂代谢紊乱作为心肌梗死对患病危险因素的相关研究.中国循环杂志，2000，15(1)：13-15.
2 Li N，Hu H，Lindqvist M，et al Platelet-leukocyte cross talk in whole blood Arterioscler Thromb Vasc Biol，2000，20：2702-2708
摘 要 目的：研究高脂血症与外周血血小板白细胞聚集体的关系。方法：运用流式细胞术检测4组样本，即对照组、高脂血症1组(HDL-C≥0.9mmol/L)、高脂血症2组(HDL-C<0.9mmol/L)、心脑血管病变组中血小板白细胞聚集体、血小板中性粒细胞聚集体和血小板单核细胞聚集体的百分比。结果：高脂血症组和高脂血症1组与对照组比较，PLA和PNA的比例差异无显著性，PMA的比例高于对照组(P<0.05)；高脂血症2组和心脑血管病变组与对照组比较，PLA、PNA和PMA均高于对照组(P<0.05)，且高脂血症2组PLA和PNA均高与高脂血症1组。结论：PLA是监测高脂血症引起动脉粥样硬化和血栓的敏感指标，测定白细胞亚群与血小板的聚集体比测定血小板与总白细胞聚集体更有意义。
关键词 流式细胞术 高脂血症 血小板白细胞聚集体
材料与方法
研究对象：高脂血症组选择2007年3～11月高脂血症患者41例，男29例，女12例，年龄31～72岁，平均47岁。入选标准参照1997年我国制订的血脂异常防治建议，血清总胆固醇(TC)>5.20mmol/L和(或)甘油三酯(TG)≥1.70mmol/L，排除肝肾疾病、炎症以及继发性高脂血症。根据高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度分为两组：高脂血症1组(HDL-C≥0.9mmol/L)和高脂血症2组(HDL-C<0.9mmol/L)。心脑血管病变组25例，男16例，女9例，年龄37～56岁，平均44岁。对照组选用健康体检者20例，其中男10例，女10例，年龄20～46岁，平均34岁。
检测仪器及试剂：单克隆抗体CD45-PC5，CD41-PE；EPICS XL型流式细胞仪。
样本采集及处理：采血(柠檬酸钠抗凝)后，立即将1ml全血加入1ml 4%多聚甲醛固定液中，4℃固定1小时，Tyrode氏缓冲液(NaCl 137.5mmol/L，MgCl2 2mmol/L，KCl 2.6mmol/L，葡萄糖5.5mmol/L，NaHCO3 12mmol/L，0.1%BSA，pH7.4)洗涤，1500g离心15分钟，共3次。取洗涤后的样本10μl，加入检测抗体各10μl，室温避光孵育20分钟，用Tyrode氏缓冲液稀释成1ml，上机检测。
流式细胞仪分析：使用CD45-PC5/SSC设备，将外周血白细胞分为中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞3个细胞群，用淋巴细胞群调整CD41表达在0.5%～1.5%，分别记录血小板白细胞聚集体(PLA)、血小板中性粒细胞聚集体(PNA)和血小板单核细胞聚集体(PMA)的百分比。
结果分析：流式细胞仪采集后的数据用软件SYSTEMTM Ⅱ SOFTWARE和WinMDI2.8分析。
统计学处理：采用SPSS10.0统计软件分析，两两比较用t检验。
结 果
见表1。高脂血症组和高脂血症1组与对照组比较，PLA和PNA的比例差异无显著性，PMA的比例高于对照组(P<0.05)；高脂血症2组和心脑血管病变组与对照组比较，PLA、PNA和PMA均高于对照组(P<0.05)，且高脂血症2组PLA和PNA均高与高脂血症1组。
讨 论
动脉粥样硬化性血栓形成的时候，血小板和白细胞被激活后分泌的趋化因子和细胞因子除可促进血小板和白细胞自身聚集外，还可促进血小板与白细胞结合，本资料结果与Habazettl等报道一致。
本研究提示HDL-C与AS发病呈负相关，当血浆HDL-C<0.9mmol/L时心脑血管疾病发生动脉粥样硬化和血栓的危险性显著增加，与赵氏[1]等报道一致。此外，本研究还提示血小板与白细胞的结合先始于血小板与单核细胞的结合，然后再进一步与中性粒细胞结合，其中的机制可能是，血脂紊乱会损伤内皮功能，尤其氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)可作用于内皮细胞，通过减少内皮一氧化氮(EDNO)合成或释放，抵制内皮细胞受体信号传导或内膜上EDNO的分解，引起内皮细胞释放氧自由基引起的氧化。损伤的内皮一方面通过内皮下暴露的胶原激活血小板，另一方面通过上调其表面ICAM-1、E-选择素、P-选择素等表达募集单核细胞，后者又可激活内皮细胞而诱导其上的粘附分子表达以使更多的单核细胞浸润，形成血小板和单核细胞的聚集体，聚集体的形成明显的加强了血小板与白细胞之间的相互作用[2]，进一步形成血小板和中性粒细胞聚集体。
综上所述，PLA是监测高脂血症引起动脉粥样硬化和血栓的敏感指标，测定白细胞亚群与血小板的聚集体比测定血小板与总白细胞聚集体更有意义，但很多因素，如温度，餐后血脂、检测仪器和血样的保存时间对PLA的形成均有明显影响，从而可能导致研究结果之间出现较大差异，因此，还需要用统一的标准和大样本临床试验解决上述问题。
参考文献
1 赵玫，白小娟，等.血脂代谢紊乱作为心肌梗死对患病危险因素的相关研究.中国循环杂志，2000，15(1)：13-15.
2 Li N，Hu H，Lindqvist M，et al Platelet-leukocyte cross talk in whole blood Arterioscler Thromb Vasc Biol，2000，20：2702-2708