【摘 要】
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目的: 通过制备细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)和核因子的抑制蛋白(Iκ-Bα)双基因共表达腺病毒载体, 检测重组腺病毒在ECV304细胞中的表达. 方法: 将Iκ-Bα
【机 构】
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西安交通大学医学院免疫学教研室,第三军医大学附属西南医院烧伤研究所
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目的: 通过制备细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)和核因子的抑制蛋白(Iκ-Bα)双基因共表达腺病毒载体, 检测重组腺病毒在ECV304细胞中的表达. 方法: 将Iκ-Bα和CTLA4Ig通过内部核糖体进入部位(IRES2)连接, 并以基因重组的形式插入腺病毒表达载体, 构建重组腺病毒, 检测 Iκ-Bα和CTLA4Ig在ECV304细胞中的蛋白表达情况及其对炎症介质TNF的调控效应.结果: (1)构建pAdTrack-CMV-CTLA4Ig-IRES2-IκBα, 与pAdEasy在BJ5183重组后转染293, 获得重组腺病毒.(2)PCR鉴定重组腺病毒正确.(3)用重组腺病毒感染体外培养的ECV304后, 该腺病毒可表达Iκ-Bα蛋白及CTLA4Ig蛋白, 且可以下调LPS攻击后TNF-α的产生. 结论: 构建人CTLA4Ig, Iκ-Bα双基因共表达腺病毒载体, 可以有效的抑制炎症因子的表达, 为进一步的CTLA4Ig免疫耐受基因治疗中的抑制, 因NF-κB的过度激活而产生的炎性反应提供研究基础.
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