探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM-2)对LPS刺激人中性粒细胞胞外诱捕网(NET)形成的作用及其机制。
方法采集1名健康成年志愿者的静脉血，分离出中性粒细胞后，按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋无活性CORM-2(iCORM-2)组。正常对照组不进行任何处理；LPS组采用1 μL 1 μg/mL的LPS刺激；LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组在采用上述相同剂量LPS刺激的同时，分别采用10 μmol/L CORM-2、50 μmol/L CORM-2、50 μmol/L iCORM-2各1 μL进行干预，常规培养1 h后检测相关指标。用碘化丙啶染色标记法检测NET数量，流式细胞仪检测细胞早期凋亡率，二氢罗丹明123荧光探针法检测活性氧生成水平(结果以平均荧光强度表示)，蛋白质印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达水平。每组以上4个实验样本数均为5。对数据行单因素方差分析、SNK检验。
结果(1)LPS组和LPS＋iCORM-2组细胞每400倍视野下NET数量与正常对照组相近(P值均大于0.05)。LPS＋10 μmol/L CORM-2组和LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞每400倍视野下NET数量较正常对照组和LPS组均明显增多(P值均小于0.05)。LPS＋iCORM-2组细胞每400倍视野下NET数量与LPS组相近(P>0.05)。(2)LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组细胞早期凋亡率较正常对照组明显增加(P值均小于0.05)，LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组细胞早期凋亡率与LPS组相近(P值均大于0.05)。(3)LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组细胞活性氧生成水平高于正常对照组(P值均小于0.05)，LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞活性氧生成水平与正常对照组相近(P>0.05)。LPS＋10 μmol/L CORM-2组和LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞活性氧生成水平明显低于LPS组(P值均小于0.05)，LPS＋iCORM-2组细胞活性氧生成水平与LPS组相近(P>0.05)。(4)LPS组和LPS＋iCORM-2组细胞磷酸化ERK1/2表达水平分别为0.031 1±0.001 4和0.030 9±0.001 8，与正常对照组的0.030 4±0.004 6相近(P值均大于0.05)；LPS＋10 μmol/L CORM-2组和LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞磷酸化ERK1/2表达水平分别为0.789 1±0.020 1和1.297 0±0.005 6，高于正常对照组(P值均小于0.05)。LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞磷酸化ERK1/2表达水平高于LPS组(P值均小于0.05)，LPS＋iCORM-2组细胞磷酸化ERK1/2表达水平与LPS组相近(P>0.05)。
结论CORM-2干预可以明显增加LPS刺激后NET的形成，其机制可能与CORM-2抑制活性氧生成和促进ERK1/2磷酸化有关。