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【摘要】目的：研究并提高藏药前列宁胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别红花、诃子、菥蓂子、藏茜草；采用高效液相色谱法同时测定没食子酸和羟基红花黄色素A。结果：薄层色谱显色清晰，阴性对照无干扰。没食子酸在33.76~337.6 μg/ml浓度范围内线性关系良好，r=0.9996，平均加样回收率为98.35%，RSD为1.36%。羟基红花黄色素A在2.68~26.80 μg/ml浓度范围内线性关系良好，r=0.9998，平均加样回收率为99.03%，RSD为0.72%。结论：该方法简便、可行、可靠，可用于控制前列宁胶囊的质量。
【关键词】前列宁胶囊；红花；诃子；菥蓂子；藏茜草；没食子酸；羟基红花黄色素A
Study on Quality Standard for Tibetan Medicine of Qianliening Capsule/Ma Hong-wei，SHAO Cheng-lei，WEI Yong-yi，et al.//Medical Innovation of China，2013，10（20）：129-132
【Abstract】Objective：To study and upgrade the quality standard of Tibetan Medicine Qianliening Capsule.Method：TLC method was used to identify Flos Carthami，Terminalia Chebula，Semen Thlaspi and Radix et Rhizoma Rubiae；Hplc was used for the determination of Gallic acid and Hydroxy Safflor yellow A.Result：Flos Carthami，Terminalia Chebula，Semen Thlaspi and Radix et Rhizoma Rubiae could be identified by TLC without the interference of negative control.Gallic acid and Hydroxy Safflor yellow A could be determined at the same time.Gallic acid was linear in the concentration range of 33.76-337.6μg/mL，r=0.9996.The average recovery rate was 98.35%，RSD=1.36%；Hydroxy Safflor yellow A had a good linear in the concentration range of 2.68-26.80 μg/ml，r=0.9998.The average recovery rate was 99.03%，RSD=0.72%.Conclusion：The method is simple，feasible，reliable，and can be effectively used for the quality control of Qianliening Capsule.
【Key words】Qianliening Capsule；Flos Carthami；Terminalia Chebula；Semen Thlaspi；Radix et Rhizoma Rubiae；Gallic acid；Hydroxy Safflor yellow A
First-author’s address：Shandong Arura Pharmaceutical Research & Development.CO.，LTD.，Ji’nan 250101，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.20.064
藏药前列宁胶囊为金诃藏药股份有限公司独家产品，由菥蓂子、诃子、蒲公英、红花、菥蓂子等13味药材组成。主要功能清热解毒，化瘀通淋，用于热毒瘀阻所引起的尿频，尿急，尿痛属中医淋证者。现行前列宁胶囊标准只有紫草茸和蒲公英两味药材的薄层色谱鉴别和没食子酸的含量测定[1]，標准有待提高。为更好的控制其内在质量，参考中国药典[2]及相关文献，经反复试验，建立了红花[3-5]、诃子[6-7]、菥蓂子[8]、藏茜草[9-11]的薄层色谱鉴别方法，并实现了同一色谱条件下，通过变化检测波长，同时检测没食子酸[12-13]和羟基红花黄色素A[14-15]的含量。所建立的方法简便、可行、专属性强，可用于该制剂质量标准的提高。
1仪器与试剂
1.1仪器KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂），L-2100型日立高效液相色谱仪（日立公司），岛津AUW-220D型电子天平。
1.2对照品与对照药材诃子对照药材（批号：121015-201004，供鉴别用）、红花对照药材（批号：120907-200911，供鉴别用）、没食子酸对照品（批号：110831-200803，供含量测定用）、羟基红花黄色素A对照品（批号：111637-200905，供含量测定用），均购自中国食品药品检定研究院。菥蓂子对照药材与藏茜草对照药材由金诃藏药股份有限公司提供。
1.3试剂硅胶G薄层板（青岛海洋化工），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。前列宁胶囊由金诃藏药股份有限公司提供，批号为：20110216、20110217、20110218。
2薄层色谱鉴别
2.1红花的鉴别取本品内容物5 g，加丙酮-甲醇（4：1）混合溶液30 ml，密塞，振摇15 min，静置，取上清液，作为供试品溶液。另取红花对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。去除处方中红花，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
2.2诃子的鉴别取本品内容物5 g，加无水乙醇25 ml，超声处理30 min，加硅藻土2 g，混匀，滤过，滤液浓缩至2 ml，作为供试品溶液。另取诃子对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。去除处方中的诃子，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
2.3菥蓂子的鉴别取红花鉴别项下的供试品溶液，作为供试品溶液。另取菥蓂子对照药材1 g，加丙酮-甲醇（4：1）混合溶液30 ml，密塞，振摇15 min，静置，取上清液作为对照药材溶液。去除处方中的菥蓂子，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5）10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图3。
2.4藏茜草的鉴别取本品内容物5 g，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。另取藏茜草对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。去除处方中的藏茜草，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-丙酮（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图4。
3含量测定
3.1色谱条件色谱柱为Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液，流动相浓度梯度见表1，流速为1.0 ml/min，没食子酸检测波长为275 nm，羟基红花黄色素A检测波长为403 nm，检测波长变化表见表2，柱温为室温。
表1流动相浓度梯度表
时间（min） 乙腈（%） 1%冰醋酸溶液（%）
0~20 1 99
20~25 1~24 99~76
25~50 24 76
50~55 24~100 76~0
55~60 100~1 0~99
表2 检测波长变化表
时间（min） 0~20 20 21 21~60
检测波长（nm） 275 403 检测器平衡 403
3.2对照品溶液的制备取没食子酸对照品、羟基红花黄色素A对照品各适量，分别精密称定，加50%的乙醇制成每1 ml含没食子酸0.2 mg，含羟基红花黄色素A10 μg的混合溶液，即得。
3.3供试品溶液的制备取藏药前列宁胶囊内容物约3 g，研细，过三号筛，精密称定，置50 ml量瓶中，加入50%乙醇40 ml，密塞，超声处理30 min，放冷，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4系统适用性试验分别吸取供试品、对照品及阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，在3.1色谱条件下测定，理论板数按没食子酸峰计算不低于2000，两种成分相互间及与其他组分的分离度均>1.5，且阴性对照无干扰，见图5。
3.5线性关系考察精密量取没食子酸对照品贮备液（337.6 μg/ml）及羟基红花黄色素A对照品贮备液（26.8 μg/ml）1 ml、3 ml、5 ml、8 ml、10 ml，分别置10 ml量瓶中，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10 μl，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，进行线性回归，得没食子酸回归方程为Y=15682X-16290，r=0.9996，没食子酸在33.76~337.6 μg/ml范围内有良好的线性关系，羟基红花黄色素A回归方程为Y=11344X-3478.5，r=0.9998，羟基红花黄色素A在2.68~26.80 μg/ml范围内有良好的线性关系。
3.6精密度试验精密吸取没食子酸、羟基红花黄色素A混合对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定色谱面积并计算相对标准偏差（RSD），结果没食子酸的RSD为0.71%，羟基红花黄色素A的RSD为0.67%。
3.7重复性试验取同一批号的样品，取6份，每份3 g，分别精密称定重量，按3.3项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算6次测定的平均含量和RSD，结果没食子酸的含量平均值为0.92 mg/粒，RSD为0.81%，羟基红花黄色素A的含量平均值为78.20 μg/粒，RSD为0.72%。
3.8稳定性试验精密吸取供试品溶液10 μl，按0、2、4、6、8 h分别进样，计算峰面积的RSD，结果没食子酸的峰面积RSD为0.84%，羟基红花黄色素A的RSD为0.97%。
3.9加样回收率试验称取已知含量的供试品6份，每份1.5 g，
置50 ml量瓶中，分别精密加入5 ml没食子酸对照品贮备液和3 ml羟基红花黄色素A对照品贮备液，加入50%乙醇32 ml，密塞，超声处理，放冷，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。本方法没食子酸和羟基红花黄色素A加样回收率分别为：98.38%，99.03%，RSD分别为：1.36%，0.72%，表明该测定方法测定结果准确。见表3、表4。
表3没食子酸加样回收率试验
取样量
（g） 理论值
（mg） 加入量
（mg） 实测值
（mg） 回收率
（%） 平均值
（%） RSD
（%）
1.5306 1.4005 1.6880 3.0712 98.76 98.35 1.36
1.5125 1.3839 3.0323 97.14
1.5067 1.3786 3.0524 98.17
1.5108 1.3824 3.0818 100.82
1.5028 1.3751 3.0217 97.13
1.5012 1.3736 3.0242 97.28
表4羟基红花黄色素A加样回收率试验
取样量
（g） 理论值
（mg） 加入量
（mg） 实测值
（mg） 回收率
（%） 平均值
（%） RSD
（%）
1.5306 0.0696 0.0804 0.1491 98.71 99.03 0.72
1.5125 0.0688 0.1487 99.27
1.5067 0.0686 0.1483 98.98
1.5108 0.0687 0.1476 97.82
1.5028 0.0684 0.1486 99.71
1.5012 0.0683 0.1485 99.71
3.10樣品含量测定取3个批号的前列宁胶囊，按照3.3项下方法制备并按照3.1项下色谱条件测定，记录色谱图，计算每批样品含量，结果见表5。
表5三批样品含量测定结果（n=3）
批号 没食子酸
（mg/粒） RSD
（%） 羟基红花黄色素A
（μg/粒） RSD（%）
20110216 0.917 0.98 77.63 1.12
20110217 0.926 1.03 75.71 1.06
20110218 0.908 0.97 76.90 1.03
4讨论
红花的鉴别中，采用药典中的80%丙酮提取，杂质斑点较多，改用丙酮-甲醇（4：1）混合溶液后，杂质干扰减轻。同时发现，用硅胶G板和硅胶H板对鉴别结果没有影响，因此选择更常用的硅胶G板。
菥蓂子的鉴别中，曾参照药典菥蓂项下的薄层鉴别方法，经试验验证，红花的供试品处理方法可同样作为菥蓂子的供试品处理方法，故红花鉴别与菥蓂子鉴别使用同一份供试品，简化了试验操作。
没食子酸和羟基红花黄色素A的含量测定文献报道都很多，但未见同时测定二者含量的报道。笔者参照有关文献[12-15]，经过反复试验，确定了文章所述的梯度洗脱方法。在供试品溶液制备中，对提取溶剂、提取方法，提取时间等进行了考察，结果以50%乙醇为提取溶剂，超声提取30 min为佳。试验结果表明，该方法的专属性强，检测灵敏度高，结果准确可靠，可用于该制剂的含量测定。
参考文献
[1]国家食品药品监督管理局.前列宁胶囊，标准编号：WS-10627（ZD-0627）-2002-2011Z[S].2002.
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[5]杜连平，马文俊，孙跃宁，等.新型藏药吉堪明目滴眼液的质量标准研究[J].中国医学创新，2011，8（33）：14-16.
[6]程东岩，王友联，宋柏林，等.诃子及其制剂中有效成分分析方法的研究进展[J].中国药师，2011，14（10）：1521-1523.
[7]贾晓英，杨明荣，王焕云.蒙成药克感额日敦片中诃子的薄层鉴别及含量测定研究[J].中国民族医药杂志，2012，18（2）：50-52.
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[9]何建华.通解口服液的薄层色谱鉴别[J].海峡药学，2010，22（2）：39-40.
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[11]李玲莉，王兰霞，倪琳，等.达斯玛保丸质量标准研究[J].中国中医药信息杂志，2011，18（10）：62-64.
[12]张小青，张雪菊.HPLC测定十味黑冰片丸中没食子酸含量[J].中国民族民间医药杂志，2012，21（19）：37-39.
[13]张力力，杨晓燕，张琦.HPLC法测定藏成药八味小檗皮散中没食子酸含量[J].西南民族大学学报：自然科学版，2012，38（5）：780-784.
[14]祈玉清，陈珏蓓.HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量[J].青海医药杂志，2012，15（4）：74-76.
[15]朱艳红.HPLC法测定古日古木-7中羟基红花黄色素A的含量[J].中国药事，2012，26（7）：754-755，758.
（收稿日期：2013-01-17）（本文编辑：连胜利）
【关键词】前列宁胶囊；红花；诃子；菥蓂子；藏茜草；没食子酸；羟基红花黄色素A
Study on Quality Standard for Tibetan Medicine of Qianliening Capsule/Ma Hong-wei，SHAO Cheng-lei，WEI Yong-yi，et al.//Medical Innovation of China，2013，10（20）：129-132
【Abstract】Objective：To study and upgrade the quality standard of Tibetan Medicine Qianliening Capsule.Method：TLC method was used to identify Flos Carthami，Terminalia Chebula，Semen Thlaspi and Radix et Rhizoma Rubiae；Hplc was used for the determination of Gallic acid and Hydroxy Safflor yellow A.Result：Flos Carthami，Terminalia Chebula，Semen Thlaspi and Radix et Rhizoma Rubiae could be identified by TLC without the interference of negative control.Gallic acid and Hydroxy Safflor yellow A could be determined at the same time.Gallic acid was linear in the concentration range of 33.76-337.6μg/mL，r=0.9996.The average recovery rate was 98.35%，RSD=1.36%；Hydroxy Safflor yellow A had a good linear in the concentration range of 2.68-26.80 μg/ml，r=0.9998.The average recovery rate was 99.03%，RSD=0.72%.Conclusion：The method is simple，feasible，reliable，and can be effectively used for the quality control of Qianliening Capsule.
【Key words】Qianliening Capsule；Flos Carthami；Terminalia Chebula；Semen Thlaspi；Radix et Rhizoma Rubiae；Gallic acid；Hydroxy Safflor yellow A
First-author’s address：Shandong Arura Pharmaceutical Research & Development.CO.，LTD.，Ji’nan 250101，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.20.064
藏药前列宁胶囊为金诃藏药股份有限公司独家产品，由菥蓂子、诃子、蒲公英、红花、菥蓂子等13味药材组成。主要功能清热解毒，化瘀通淋，用于热毒瘀阻所引起的尿频，尿急，尿痛属中医淋证者。现行前列宁胶囊标准只有紫草茸和蒲公英两味药材的薄层色谱鉴别和没食子酸的含量测定[1]，標准有待提高。为更好的控制其内在质量，参考中国药典[2]及相关文献，经反复试验，建立了红花[3-5]、诃子[6-7]、菥蓂子[8]、藏茜草[9-11]的薄层色谱鉴别方法，并实现了同一色谱条件下，通过变化检测波长，同时检测没食子酸[12-13]和羟基红花黄色素A[14-15]的含量。所建立的方法简便、可行、专属性强，可用于该制剂质量标准的提高。
1仪器与试剂
1.1仪器KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂），L-2100型日立高效液相色谱仪（日立公司），岛津AUW-220D型电子天平。
1.2对照品与对照药材诃子对照药材（批号：121015-201004，供鉴别用）、红花对照药材（批号：120907-200911，供鉴别用）、没食子酸对照品（批号：110831-200803，供含量测定用）、羟基红花黄色素A对照品（批号：111637-200905，供含量测定用），均购自中国食品药品检定研究院。菥蓂子对照药材与藏茜草对照药材由金诃藏药股份有限公司提供。
1.3试剂硅胶G薄层板（青岛海洋化工），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。前列宁胶囊由金诃藏药股份有限公司提供，批号为：20110216、20110217、20110218。
2薄层色谱鉴别
2.1红花的鉴别取本品内容物5 g，加丙酮-甲醇（4：1）混合溶液30 ml，密塞，振摇15 min，静置，取上清液，作为供试品溶液。另取红花对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。去除处方中红花，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。
2.2诃子的鉴别取本品内容物5 g，加无水乙醇25 ml，超声处理30 min，加硅藻土2 g，混匀，滤过，滤液浓缩至2 ml，作为供试品溶液。另取诃子对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。去除处方中的诃子，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。
2.3菥蓂子的鉴别取红花鉴别项下的供试品溶液，作为供试品溶液。另取菥蓂子对照药材1 g，加丙酮-甲醇（4：1）混合溶液30 ml，密塞，振摇15 min，静置，取上清液作为对照药材溶液。去除处方中的菥蓂子，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5）10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图3。
2.4藏茜草的鉴别取本品内容物5 g，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。另取藏茜草对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。去除处方中的藏茜草，将处方中其他药材按比例制成胶囊剂，再按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-丙酮（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。见图4。
3含量测定
3.1色谱条件色谱柱为Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液，流动相浓度梯度见表1，流速为1.0 ml/min，没食子酸检测波长为275 nm，羟基红花黄色素A检测波长为403 nm，检测波长变化表见表2，柱温为室温。
表1流动相浓度梯度表
时间（min） 乙腈（%） 1%冰醋酸溶液（%）
0~20 1 99
20~25 1~24 99~76
25~50 24 76
50~55 24~100 76~0
55~60 100~1 0~99
表2 检测波长变化表
时间（min） 0~20 20 21 21~60
检测波长（nm） 275 403 检测器平衡 403
3.2对照品溶液的制备取没食子酸对照品、羟基红花黄色素A对照品各适量，分别精密称定，加50%的乙醇制成每1 ml含没食子酸0.2 mg，含羟基红花黄色素A10 μg的混合溶液，即得。
3.3供试品溶液的制备取藏药前列宁胶囊内容物约3 g，研细，过三号筛，精密称定，置50 ml量瓶中，加入50%乙醇40 ml，密塞，超声处理30 min，放冷，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4系统适用性试验分别吸取供试品、对照品及阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，在3.1色谱条件下测定，理论板数按没食子酸峰计算不低于2000，两种成分相互间及与其他组分的分离度均>1.5，且阴性对照无干扰，见图5。
3.5线性关系考察精密量取没食子酸对照品贮备液（337.6 μg/ml）及羟基红花黄色素A对照品贮备液（26.8 μg/ml）1 ml、3 ml、5 ml、8 ml、10 ml，分别置10 ml量瓶中，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，各精密进样10 μl，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，进行线性回归，得没食子酸回归方程为Y=15682X-16290，r=0.9996，没食子酸在33.76~337.6 μg/ml范围内有良好的线性关系，羟基红花黄色素A回归方程为Y=11344X-3478.5，r=0.9998，羟基红花黄色素A在2.68~26.80 μg/ml范围内有良好的线性关系。
3.6精密度试验精密吸取没食子酸、羟基红花黄色素A混合对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定色谱面积并计算相对标准偏差（RSD），结果没食子酸的RSD为0.71%，羟基红花黄色素A的RSD为0.67%。
3.7重复性试验取同一批号的样品，取6份，每份3 g，分别精密称定重量，按3.3项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算6次测定的平均含量和RSD，结果没食子酸的含量平均值为0.92 mg/粒，RSD为0.81%，羟基红花黄色素A的含量平均值为78.20 μg/粒，RSD为0.72%。
3.8稳定性试验精密吸取供试品溶液10 μl，按0、2、4、6、8 h分别进样，计算峰面积的RSD，结果没食子酸的峰面积RSD为0.84%，羟基红花黄色素A的RSD为0.97%。
3.9加样回收率试验称取已知含量的供试品6份，每份1.5 g，
置50 ml量瓶中，分别精密加入5 ml没食子酸对照品贮备液和3 ml羟基红花黄色素A对照品贮备液，加入50%乙醇32 ml，密塞，超声处理，放冷，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。本方法没食子酸和羟基红花黄色素A加样回收率分别为：98.38%，99.03%，RSD分别为：1.36%，0.72%，表明该测定方法测定结果准确。见表3、表4。
表3没食子酸加样回收率试验
取样量
（g） 理论值
（mg） 加入量
（mg） 实测值
（mg） 回收率
（%） 平均值
（%） RSD
（%）
1.5306 1.4005 1.6880 3.0712 98.76 98.35 1.36
1.5125 1.3839 3.0323 97.14
1.5067 1.3786 3.0524 98.17
1.5108 1.3824 3.0818 100.82
1.5028 1.3751 3.0217 97.13
1.5012 1.3736 3.0242 97.28
表4羟基红花黄色素A加样回收率试验
取样量
（g） 理论值
（mg） 加入量
（mg） 实测值
（mg） 回收率
（%） 平均值
（%） RSD
（%）
1.5306 0.0696 0.0804 0.1491 98.71 99.03 0.72
1.5125 0.0688 0.1487 99.27
1.5067 0.0686 0.1483 98.98
1.5108 0.0687 0.1476 97.82
1.5028 0.0684 0.1486 99.71
1.5012 0.0683 0.1485 99.71
3.10樣品含量测定取3个批号的前列宁胶囊，按照3.3项下方法制备并按照3.1项下色谱条件测定，记录色谱图，计算每批样品含量，结果见表5。
表5三批样品含量测定结果（n=3）
批号 没食子酸
（mg/粒） RSD
（%） 羟基红花黄色素A
（μg/粒） RSD（%）
20110216 0.917 0.98 77.63 1.12
20110217 0.926 1.03 75.71 1.06
20110218 0.908 0.97 76.90 1.03
4讨论
红花的鉴别中，采用药典中的80%丙酮提取，杂质斑点较多，改用丙酮-甲醇（4：1）混合溶液后，杂质干扰减轻。同时发现，用硅胶G板和硅胶H板对鉴别结果没有影响，因此选择更常用的硅胶G板。
菥蓂子的鉴别中，曾参照药典菥蓂项下的薄层鉴别方法，经试验验证，红花的供试品处理方法可同样作为菥蓂子的供试品处理方法，故红花鉴别与菥蓂子鉴别使用同一份供试品，简化了试验操作。
没食子酸和羟基红花黄色素A的含量测定文献报道都很多，但未见同时测定二者含量的报道。笔者参照有关文献[12-15]，经过反复试验，确定了文章所述的梯度洗脱方法。在供试品溶液制备中，对提取溶剂、提取方法，提取时间等进行了考察，结果以50%乙醇为提取溶剂，超声提取30 min为佳。试验结果表明，该方法的专属性强，检测灵敏度高，结果准确可靠，可用于该制剂的含量测定。
参考文献
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（收稿日期：2013-01-17）（本文编辑：连胜利）