重组FAS分子的表达,纯化及抗体制备

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ss501love

【摘要】

：

用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段，直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，经ＤＮＡ序列测定后，再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲ１和ＳａｌＩ位点之间，构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ，将此质粒导入大肠杆菌，经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ，重组融

【作者】

：

罗振革孔祥英

【机构】

：

军事医学科学院微生物流行病研究所

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

1999年2期

【关键词】

：

FAS分子 GST融合蛋白亲合层析纯化抗体重组 FAS GST fusion protein Purification AntiFAS antibo

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用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段，直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，经ＤＮＡ序列测定后，再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲ１和ＳａｌＩ位点之间，构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ，将此质粒导入大肠杆菌，经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ，重组融合蛋白的表达，用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白，经凝血酶酶

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