【摘 要】
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为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline),荧光域值的默认
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为了便于对所检测样本进行比较,在real-time Q-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline),荧光域值的默认设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号,它可用于定义样本的临界循环数(Ct)即每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。本研究表明每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,即起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,因此只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数,可以对科研和生产起到一定的参考价值。
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