同型半胱氨酸对巨噬细胞中Line-1 DNA甲基化标准曲线的影响

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目的寻找简单、可靠、经济准确的检测巨噬细胞中Line-1甲基化水平的实验方法。方法体外培养单核细胞源性巨噬细胞,不同浓度Hcy作用后以甲基化特异性PCR检测Line-1 DNA甲基化水平变化后,分别克隆扩增相应的片段,将不同浓度稀释的甲基化和非甲基化样品分别加入到荧光PCR体系中,按照荧光PCR体系进行操作,检测其荧光表达,根据相应的稀释倍数与扩增数做出相应的标准曲线。结果各Hcy浓度组的Line-1 DNA甲基化程度随Hcy浓度的增高甲基化程度升高,Line-1 DNA甲基化程度与对照组比较,分别上升了1.30、1.52、1.61、2.18倍,差异有统计学意义(<0.05);分别得到Line-1 DNA甲基化标准曲线:Y=-4.3448x+51.512;非甲基化标准曲线:Y=-2.7406x+36.208。结论 Line-1 DNA甲基化与Hcy介导的动脉粥样硬化关系密切,荧光定量PCR法建立的标准曲线是检测Line-1 DNA甲基化水平的一种方便且准确的方法。
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