【摘 要】
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目的探讨环状定点诱变技术在目标质粒单碱基突变,酶切位点修改和片段删除中的应用。方法设计包含目标突变,部分互补且5’端含有5~8 bp突出的引物对,环状质粒作为模板进行扩增
【机 构】
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华兰基因工程有限公司质量控制部,华兰基因工程有限公司重组细胞室
【基金项目】
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“重大新药创制”科技重大专项(2018ZX09736010)
论文部分内容阅读
目的探讨环状定点诱变技术在目标质粒单碱基突变,酶切位点修改和片段删除中的应用。方法设计包含目标突变,部分互补且5’端含有5~8 bp突出的引物对,环状质粒作为模板进行扩增,甲基化酶DpnI酶消化去除模板质粒。转化DH5α感受态进行缺口修复,获得定点突变的目标质粒。结果通过酶切和基因测序证明,环状定点诱变技术可高效用于单碱基突变、酶切位点修改和片段删除等突变。结论环状定点诱变技术能够简便、高效、快捷地实现目标质粒的单碱基突变、酶切位点修改和片段删除,基本满足药物开发过程中载体构建的需求。
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